[發(fā)明專利]一種木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷制備方法及用途有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310279934.9 | 申請(qǐng)日： | 2013-07-04 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104277083B | 公開（公告）日： | 2019-04-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 姜新剛;趙韶華;張秋艷;賈繼明;宋劍 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07H17/07 | 分類號(hào)： | C07H17/07;C07H1/08;A61P9/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 050035 河北省石*** | 國(guó)省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 木犀 葡萄 糖醛酸 制備 方法 用途 | ||
1.一種木犀草素-7- o-β-D-葡萄糖醛酸苷制備方法，其特征在于包括以下步驟：
A、提取：稱取苦碟子，向苦碟子中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小時(shí)，回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并提取液，在40-60℃條件下減壓濃縮得到生藥濃度為0.8-1.2g/ml的濃縮液Ⅰ；
B、水沉：向濃縮液Ⅰ中加入3-6倍量去離子水，4-10℃冷藏，過濾，濾液備用；
C、純化：將B步驟中所得濾液依次經(jīng)過HZ820大孔吸附樹脂純化，按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為1:1.5稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在PH3.5-4.0條件下，將濾液上樣，上樣流速為2-4BV/h，上樣后飽和1小時(shí)；再用PH3.5-4.0的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為4-6BV/h，洗脫用量為4-6BV；再用60%乙醇洗脫，洗脫流速6-8BV/h，洗脫用量為6-8BV，收集洗脫液，在40-60℃條件下減壓濃縮得到濃度為0.2-0.5g/ml濃縮液Ⅱ； 聚酰胺純化，聚酰胺為30-60目，聚酰胺與生藥質(zhì)量比為1:6，將濃縮液Ⅱ上樣，上樣流速為2-4BV/h，上樣后飽和1h，先用14-16BV水以流速4-6BV/h洗脫，再用10-12BV 20%乙醇以流速4-6BV/h洗脫，除去雜質(zhì)，然后再用14-16BV的70%乙醇以流速6-8BV/h洗脫，收集洗脫液，在40-60℃條件下減壓濃縮得到濃度為0.9-1.1g/ml濃縮液Ⅲ；XAD7HP大孔吸附樹脂純化，按照樹脂與生藥質(zhì)量比為2.03:1稱取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液Ⅲ調(diào)PH8.5-9.0上樣，上樣流速為1-2BV/h，上樣后飽和30分鐘，再用4-5BV的10%乙醇以流速6-8BV/h洗脫，收集洗脫液，在40-60℃條件下減壓濃縮得到濃度為12-15g/ml濃縮液Ⅳ； 高壓制備色譜或中壓制備色譜純化兩次，然后按照色譜峰收集目標(biāo)化合物，然后減壓濃縮、冷凍干燥即得，其中所述高壓制備色譜的C18填料與生藥質(zhì)量比為1:3，純化兩次，按照色譜峰收集木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷藥液；所述中壓制備色譜純化步驟如下：中壓制備色譜的C18填料與生藥質(zhì)量比為1:6，純化兩次，按照色譜峰收集木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷藥液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
A、提取：稱取苦碟子，向苦碟子中加10倍量40%乙醇浸泡1-3小時(shí)，回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并提取液，在60℃條件下減壓濃縮得到生藥濃度為1.2g/ml的濃縮液Ⅰ；
B、水沉：向濃縮液Ⅰ中加入6倍量去離子水，4℃冷藏，過濾，濾液備用；
C、將B步驟中所得濾液經(jīng)過大孔吸附樹脂Ⅰ純化，按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為1:1.5稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在PH3.5-4.0條件下，將濾液上樣，上樣流速為2BV/h，上樣后飽和1小時(shí)；再用PH3.5的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為4BV/h，洗脫用量為6BV；再用60%乙醇洗脫，洗脫流速6BV/h，洗脫用量為8BV，收集洗脫液，在60℃條件下減壓濃縮得到濃度為0.2g/ml濃縮液Ⅱ；
D、將步驟C中所得濃縮液Ⅱ通過聚酰胺純化，聚酰胺為30目，聚酰胺與生藥質(zhì)量比為1:6，將濃縮液Ⅱ上樣，上樣流速為2BV/h，上樣后飽和1h，先用16BV水以流速4BV/h洗脫，再用12BV 20%乙醇以流速4BV/h洗脫，除去雜質(zhì)，然后再用16BV的70%乙醇以流速8BV/h洗脫，收集洗脫液，在60℃條件下減壓濃縮得到濃度為0.9g/ml濃縮液Ⅲ；
E、將步驟D中所得濃縮液Ⅲ通過大孔吸附樹脂Ⅱ，按照樹脂與生藥質(zhì)量比為2.03:1稱取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液Ⅲ調(diào)PH8.5上樣，上樣流速為1BV/h，上樣后飽和30分鐘，再用4BV的10%乙醇以流速6BV/h洗脫，收集洗脫液，在60℃條件下減壓濃縮得到濃度為15g/ml濃縮液Ⅳ；
F、將步驟E中所得濃縮液Ⅳ通過高壓制備色譜純化，高壓制備色譜的C18填料與生藥質(zhì)量比為1:3，純化兩次，按照色譜峰收集木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷藥液，然后減壓濃縮，冷凍干燥，即得木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
A、提取：稱取苦碟子，向苦碟子中加12倍量40-70%乙醇浸泡2小時(shí)，回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并提取液，在50℃條件下減壓濃縮得到生藥濃度為1.0g/ml的濃縮液Ⅰ；
B、水沉：向濃縮液Ⅰ中加入4倍量去離子水，6℃冷藏，過濾，濾液備用；
C、將B步驟中所得濾液經(jīng)過大孔吸附樹脂Ⅰ純化，按照樹脂與生藥的質(zhì)量比為1:1.5稱取HZ820大孔吸附樹脂，濕樹脂裝柱，在PH4.0條件下，將濾液上樣，上樣流速為3BV/h，上樣后飽和1小時(shí)；再用PH4.0的10%乙醇洗去雜質(zhì)，洗脫流速為5BV/h，洗脫用量為5BV；再用60%乙醇洗脫，洗脫流速7BV/h，洗脫用量為7BV，收集洗脫液，在50℃條件下減壓濃縮得到濃度為0.3g/ml濃縮液Ⅱ；
D、將步驟C中所得濃縮液Ⅱ通過聚酰胺純化，聚酰胺為50目，聚酰胺與生藥質(zhì)量比為1:6，將濃縮液Ⅱ上樣，上樣流速為3BV/h，上樣后飽和1h，先用15BV水以流速5BV/h洗脫，再用11BV 20%乙醇以流速5BV/h洗脫，除去雜質(zhì)，然后再用15BV的70%乙醇以流速7BV/h洗脫，收集洗脫液，在50℃條件下減壓濃縮得到濃度為1.0g/ml濃縮液Ⅲ；
E、將步驟D中所得濃縮液Ⅲ通過大孔吸附樹脂Ⅱ，按照樹脂與生藥質(zhì)量比為2.03:1稱取XAD7HP吸附樹脂，濕樹脂裝柱，將濃縮液Ⅲ調(diào)PH9.0上樣，上樣流速為2BV/h，上樣后飽和30分鐘，再用5BV的10%乙醇以流速7BV/h洗脫，收集洗脫液，在50℃條件下減壓濃縮得到濃度為13g/ml濃縮液Ⅳ；
F、將步驟E中所得濃縮液Ⅳ通過中壓制備色譜純化，中壓制備色譜的C18填料與生藥質(zhì)量比為1:6，純化兩次，按照色譜峰收集木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷藥液，然后減壓濃縮，冷凍干燥，即得木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。
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