[發明專利]一種利用響應曲面法優化菊芋秸稈綠原酸的提取方法

有效

• 申請號: 201310278951.0
• 申請日: 2013-07-04
• 公開（公告）號: CN103333068A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 邵赟;畢宏濤;劉增根;岳會蘭;于瑞濤;梅麗娟
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: C07C69/732
• 分類號: C07C69/732;C07C67/48;G01N30/06
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.一種利用響應曲面法優化菊芋秸稈綠原酸的提取方法，包括以下步驟：

⑴樣品溶液制備：

將菊芋秸稈洗凈，在30~70℃溫度下烘干12~72h后粉碎至60~100目，按20~30?mL/g料液比加入質量濃度為50%~70%的不同濃度的乙醇溶液，在50~70℃不同提取溫度下按60~100min進行提取，提取后的溶液分別以5000轉/min進行離心，20min后收集上清液，沉淀重復提取2~3次，合并得到對應于不同濃度乙醇溶液的提取液；所述對應于不同濃度乙醇溶液的提取液用其所對應濃度的乙醇溶液定容至相同體積；

⑵用HPLC法測定每個提取液中綠原酸含量：

①綠原酸標準溶液的制備：

精密稱取綠原酸對照品10?mg，用質量濃度為60%乙醇溶解并定容于50?mL容量瓶，搖勻，得到0.2mg/mL儲備液；再分別稀釋0.2mg/mL儲備液至0.1mg/mL、0.08mg/mL、0.06mg/mL、0.04mg/mL、0.02?mg/mL和0.01?mg/mL，用質量濃度為60%乙醇定容于25?mL容量瓶搖勻待用；

②色譜條件：

色譜柱：Dikma?SynerSi?4u?Fusion-RP?80R?250×4.6mm?4?micron；柱溫：30℃；流速：1.0?mL/min；檢測波長：327?nm；流動相：0.2%磷酸：乙腈=82:18；進樣量10μL；

③綠原酸含量標準曲線的制作：

以峰面積積分值為縱坐標Y，樣品質量μg為橫坐標X，繪制標準曲線，并建立回歸方程為Y?=?1503.3X?+?183.62，相關性R²為0.9994；

⑶實驗設計與統計分析

①單因素試驗

依次改變提取溶劑乙醇濃度、提取時間、提取溫度、料液比進行單因素試驗，用HPLC法測定所得的菊芋秸稈綠原酸提取液中綠原酸的含量，并按下式計算綠原酸產率，每次處理重復三次：

綠原酸產率(%)=（提取液中綠原酸質量/菊芋秸稈原料質量）×100%；

②響應面法優化設計：

根據單因素試驗結果，選取綠原酸提取效果影響較顯著的提取溶劑乙醇濃度、提取時間、提取溫度、料液比這4個因素，利用Design?Expert?8.0軟件根據Box-Behnken設計原則進行實驗設計，以乙醇濃度A、提取時間B、提取溫度C和料液比D為自變量，以綠原酸的產率為響應值y，建立多元二次回歸方程：

Y?=?-43.53912?+?0.80192A+?0.18447B+?0.60434C+?0.073179D-?8.14275?×?10^-4?AB-?2.51685?×?10^-3AC+?4.65300?×?10^-4AD+?5.51662?×?10^-4BC+?7.40250?×?10^-4BD+?1.05045?×?10^-3CD-?4.28194?×?10^-3A^2?-?9.03487?×?10^-4B^2?+?4.15504?×?10^-4C^2?-?3.81029?×?10^-3D²；

⑷實驗結果分析與優化：

利用Design?Expert?8.0軟件根據多元二次回歸方程進行繪圖分析，得到回歸方程的響應面及其等高線圖。