[發明專利]鹿產品中激素和肌苷的分析測試方法

有效

• 申請號: 201310277890.6
• 申請日: 2013-07-03
• 公開（公告）號: CN103336076A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 胡文忠;姜波;姜愛麗;田密霞;王艷穎;何煜波;劉程惠;劉成;肖振鐸
• 申請（專利權）人: 大連民族學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生;李馨

技術領域

本發明屬于來源于動物的藥物中有效成分的分析方法的技術范圍。具體涉及鹿體材料中有效成分分析方法。

背景技術

鹿全身都是寶，鹿茸、鹿胎、鹿血、鹿角等均為名貴藥材，在我國藥用歷史悠久。“鹿茸”、“鹿角”、“全鹿”等的功能與主治病證首載于《神農本草經》，此后，中國歷代本草皆對鹿的不同藥用部位進行了大量收載。《本草新編》中記載的“鹿胎”等，在《本草綱目》中記載鹿藥用部位有“鹿茸”、“鹿角”、“鹿骨”、“鹿肉”等的性味、功能與主治病癥，鹿不同部位的中藥材至今仍廣泛應用于臨床中。激素是生物體內具有高度生物活性的一類物質，在生物體內即使微量(如ng級水平)也可起到生物活性作用。肌苷是機體內ATP、輔酶A、核糖核酸及脫氧核糖核酸的組成部分，參與機體的物質代謝和能量代謝。它能提高機體ATP的水平，可轉化為多種核苷酸，并參與蛋白質的合成。適用于各種原因引起的白細胞減少癥、血小板減少癥、各種心臟疾患、急性及慢性肝炎、肝硬化等，此外尚可治療中心視網膜炎、視神經萎縮等。因此對鹿中藥材性激素和肌苷含量進行分析，對控制鹿藥材的質量及揭示其療效作用的物質基礎具有重要的意義。

目前對中藥材真偽的鑒別還主要停留在僅憑感官和經驗來判斷的水平，具有很嚴重的不準確性和不科學性，中藥材成分的檢測也還是處于積累和開發階段。

動物性激素目前主要采用試劑盒法進行檢測，測一種激素需使用一種試劑盒，操作起來比較繁瑣。現公開發表的液相色譜方法，僅能測一、兩種激素，同時存在著多種激素未被分開，而被誤認為一種激素，從而使測定結果有嚴重不準的可能。

發明內容

本發明的目的在于提供一種激素和肌苷的快速、準確的高效液相色譜分析方法，所述的激素為雌二醇、雌三醇、皮質醇、孕酮、雌酮、前列腺素E₁和前列腺素E₂中的一種。

本發明采用高效液相色譜同時測定鹿中藥材中的7種激素和肌苷含量的方法，色譜條件是ODS?C8色譜柱，以乙腈和水為流動相，乙腈和水體積比為80:20，流速為0.6～1.2ml/min，柱溫30℃，進樣量25μl，用二級管陣列檢測器，檢測波長：雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮質醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E₁212nm、E₂242nm，肌苷244nm。將處理好的標準對照品和試樣溶液進行液相色譜分析，以對應的峰面積，用標準工作曲線計算相應的激素含量。

本發明的一方面在于，公開一種鹿產品中激素和肌苷的分析測試方法，其包括以下操作步驟，

A.標準對照品溶液的制備：

分別稱取雌二醇、雌三醇、皮質醇、孕酮、雌酮、前列腺素E₁和前列腺素E₂、肌苷的標準對照品作為溶質，混合后加入溶劑甲醇使其溶解；制得的混合液為混合標準貯備液；所述混合標準貯備液中各溶質濃度均為1mg/mL；分別移出一定量的混合標準貯備液用乙腈和甲醇稀釋，分別制得各溶質濃度均為1mg/L、2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L的混合標準對照品溶液，且每個濃度的混合標準對照品溶液中均含有體積比為10%的甲醇；

B.鹿產品試樣溶液的制備：

按照0.3～1.0g鹿產品用10ml甲醇定容的比例將樣品混合均勻，再用超聲波破碎儀破碎3min，在4000r/min下離心20min，從上清液中取出1mL用乙腈定容至10mL，進行色譜分析；

C.色譜分析：

將步驟A制備的標準對照品溶液和步驟B制備的鹿產品試樣溶液分別進行液相色譜分析，以對應的峰面積，用標準工作曲線計算相應的樣品含量，液相色譜分析的條件如下：

采用ODS?C8色譜柱，流動相為乙腈和水體積比為4:1，流速為0.6～1.2ml/min，柱溫30℃，進樣量25μl；

用二級管陣列檢測器分別檢測波長，其中雌二醇212nm，雌三醇204nm，皮質醇242nm，雌酮281nm，孕酮254nm，前列腺素E₁212nm、E₂242nm，肌苷244nm。

對于上述技術方案中，優選的情況下，所述步驟B中所述的鹿產品為鹿茸、鹿胎、鹿角帽和鹿血中的一種；所述鹿血為公鹿或母鹿的鮮血。

對于上述技術方案中，優選的情況下，所述步驟B中所述的鹿產品為鹿血時，按照1.0g鹿血用10ml甲醇定容的比例將樣品混合均勻；鹿產品為鹿茸、鹿胎或鹿角帽時，按照0.3g鹿茸、鹿胎或鹿角帽用10ml甲醇定容的比例將樣品混合均勻。