[發(fā)明專利]伏立諾他的用途及促進(jìn)海綿共生土曲霉合成(+)-Terrein的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310275382.4
• 申請日: 2013-07-02
• 公開（公告）號: CN103497975A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖嵐;李志勇;張風(fēng)麗
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12R1/66
• 代理公司: 上海漢聲知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種提高真菌代謝產(chǎn)物產(chǎn)量的方法，具體是伏立諾他的用途及促進(jìn)海綿共生土曲霉合成(+)-Terrein的方法。?

背景技術(shù)

(+)-Terrein（土曲霉酮）是由6-羥基蜂蜜曲菌素經(jīng)過后修飾而成的環(huán)戊烯酮類化合物，1935年首次從土曲霉中分離得到。(+)-Terrein有著良好的生物活性，如抗細(xì)菌和真菌、抑制雜草生長、抑制腫瘤細(xì)胞血管新生素的分泌、促進(jìn)成骨細(xì)胞與鈦支架融合、抑制黑色素合成、抑制皮膚角質(zhì)增生、抑制牙髓細(xì)胞炎癥反應(yīng)還有乳腺癌細(xì)胞毒性等等。其在農(nóng)業(yè)、美容、醫(yī)藥等方面廣泛的應(yīng)用前景使得我們有必要提高其單位產(chǎn)量為后續(xù)更深入的研究提供原料基礎(chǔ)。?

目前報(bào)道中，通過傳統(tǒng)的揺瓶發(fā)酵培養(yǎng)優(yōu)化，在Aspergillus?terreus?PF26中(+)-Terrein的產(chǎn)量能達(dá)到3.71g/L(Ying?Yin,et?al.Medium?optimization?for?the?high?yield?production?of?single(+)-Terrein?by?Aspergillus?terreus?strain?PF26derived?from?marine?sponge?Phakellia?fusca2012,47(5):887-891)；在優(yōu)化后的培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加聚酮合成途徑的促進(jìn)劑檸檬酸鈉使得揺瓶上(+)-Terrein的產(chǎn)量能提高到5.38g/L(Yin?Y,et?al.Enhanced?production?of(+)-Terrein?in?fed-batch?cultivation?of?Aspergillus?terreus?strain?PF26with?sodium?citrate.World?Journal?of?Microbiology?and?Biotechnology2013;29(3):441-446.)，但有必要進(jìn)一步提高其產(chǎn)量。表觀遺傳修飾劑能夠調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄水平從而影響代謝，本發(fā)明從促進(jìn)土曲霉基因的轉(zhuǎn)錄水平著手，添加表觀遺傳修飾劑至土曲霉的發(fā)酵液中以期提高(+)-Terrein產(chǎn)量。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種伏立諾他的用途及促進(jìn)海綿共生土曲霉合成(+)-Terrein的方法。?

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：?

第一方面，本發(fā)明涉及到一種伏立諾他作為促進(jìn)劑的用途，所述伏立諾他能夠促進(jìn)海綿共生土曲霉合成(+)-Terrein。?

第二方面，本發(fā)明還涉及前述伏立諾他促進(jìn)海綿共生土曲霉合成(+)-Terrein的方法，包括如下步驟：在海綿共生土曲霉發(fā)酵的過程中添加伏立諾他。?

優(yōu)選地，包括如下步驟：發(fā)酵海綿共生土曲霉，向發(fā)酵液中添加伏立諾他，即可促進(jìn)(+)-Terrein的合成。?

優(yōu)選地，所述海綿共生土曲霉為土曲霉（Aspergillus?terreus）PF26CGMCC?NO.5208。?

優(yōu)選地，所述發(fā)酵使用的培養(yǎng)基的制備方法包括如下步驟：每1L純水對應(yīng)取如下質(zhì)量的各組分：28.41g葡萄糖、23.18g麥芽糖、20.00g甘露醇、8.52g麥芽提取物、10.00g谷氨酸鈉、10.00g氯化銨、3.90g硫酸鈉，之后將所述組分溶于1L純水中，即得。?

優(yōu)選地，所述發(fā)酵采用搖瓶發(fā)酵，在發(fā)酵的第4天，添加伏立諾他。?

優(yōu)選地，所述添加伏立諾他具體為，發(fā)酵液中伏立諾他的終濃度為900μM。?

優(yōu)選地，所述添加伏立諾他具體為：稱取適量的伏立諾他，溶解于DMSO中，使得伏立諾他的濃度為0.18M，之后采用無菌濾膜過濾，得到伏立諾他母液，之后添加于發(fā)酵液中。?

優(yōu)選地，所述無菌濾膜的孔徑為0.22μm。?

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有益效果為：?

（1）本發(fā)明在搖瓶水平上，于第4天添加終濃度為900μM的伏立諾他，24天后，(+)-Terrein的產(chǎn)量達(dá)到5.58g/L，較未添加時的產(chǎn)量為4.31g/L，提高了49.8%，(+)-Terrein的產(chǎn)量有較為顯著的提高。?

（2）本發(fā)明方法簡單，容易實(shí)現(xiàn)，效率高，效果顯著，有較好的應(yīng)用前景。?

附圖說明

通過閱讀參照以下附圖對非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將會變得更明顯：?

圖1不同的表觀遺傳修飾劑對土曲霉產(chǎn)(+)-Terrein的影響圖；?

圖2不同濃度伏立諾他時對土曲霉產(chǎn)(+)-Terrein的影響圖；?