[發(fā)明專利]一種淋球菌/解脲支原體/沙眼衣原體三重核酸檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310275243.1
• 申請日: 2013-07-02
• 公開（公告）號: CN103409508A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王國強;劉中華;李榮宇;方存磊;張旭
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇碩世生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種核酸檢測試劑盒，具體涉及一種淋球菌/解脲支原體/沙眼衣原體三重核酸檢測試劑盒，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

性病是以性接觸為主要傳播方式的一組疾病。性病是危害人類最嚴重、發(fā)病最廣泛的一種傳染病，它不僅危害個人健康，也殃及家庭，遺害后代，同時還危害社會。性病對人體健康的損害是多方面的。感染性病后如果不能及時發(fā)現(xiàn)并徹底治療，不僅可損害人的生殖器官，導致不育，有些性病還可損害心臟、腦等人體的重要器官，甚至導致死亡。有些性病一旦染上是難以治愈的，如尖銳濕疣、生殖器皰疹。

國際上將20多種通過性行為引起的感染性疾病列入性病范疇，國際衛(wèi)生組織將性病分為4個等級。其中，二級性病的致病微生物中包括淋球菌（NG）、解脲支原體（UU）、以及沙眼衣原體（CT）。

淋病奈瑟球菌(Neisseria?gonorrhoeae，NG，簡稱淋球菌)為嚴格的人體寄生菌，革蘭染色陰性，常存在于急性尿道炎與陰道炎的膿性分泌物的白細胞中，形態(tài)染色類似于腦膜炎球菌。淋球菌引起泌尿生殖系統(tǒng)化膿性感染，俗稱淋病，是常見的性傳播疾病之一，目前在世界上廣泛流行。臨床表現(xiàn)以尿道炎、宮頸炎多見，典型癥狀是排尿困難、尿頻、尿急、尿痛、排出黏液或膿性分泌物等。

解脲支原體（Ureaplasma?urealyticum，UU）是脲原體屬中的一種，是人類泌尿生殖道常見的寄生菌之一，是非淋球菌性尿道炎（NGU）的常見病原體之一。解脲支原體多寄生在男性尿道、陰莖包皮和女性陰道。若上行感染，可引起男性前列腺炎或附睪炎、女性陰道炎、宮頸炎，并可感染胎兒導致流產(chǎn)、早產(chǎn)及低體重胎兒，也能引起新生兒呼吸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染。

沙眼衣原體（chlamydia?trachomatis，CT）是一類在細胞內(nèi)寄生的微生物，革蘭氏陰性。目前發(fā)現(xiàn)它有15個血清型，不同的血清型能引起不同的疾病。分為3個生物型，即小鼠生物型(biovarmouse)、沙眼生物型(biovartrachoma)和性病淋巴肉芽腫生物型。后二者與人類疾病有關(guān)。沙眼衣原體可以引起沙眼、包涵體包膜炎、泌尿生殖道感染、性病淋巴肉芽腫等疾病。其中A、B、Ba及C型的衣原體株能引起沙眼，L1、L2、L3型能引起性病性淋巴肉芽腫，D-K型則引起非淋菌性尿道炎。非淋菌性尿道炎（NGU）的40%～50%是由沙眼衣原體感染引起的。

目前，淋球菌（NG）、解脲支原體(UU)及沙眼衣原體（CT）的檢測方法主要有細菌的分離培養(yǎng)，免疫學診斷和分子生物學診斷。病原體的分離培養(yǎng)和免疫學診斷是性病病原體實驗室診斷的常規(guī)方法，分子生物學診斷中出現(xiàn)了許多快速特異的方法,三種方法具有以下特點：

1）病原體的分離培養(yǎng)是淋球菌（NG）、解脲支原體(UU)及沙眼衣原體（CT）檢測的金標準。但分離培養(yǎng)法對技術(shù)要求較高，費用較昂貴，耗時長，且各實驗室分離陽性率各不相同，目前多用于實驗研究。

2）血清學方法不能高通量處理樣本，不能準確反映當前是否感染或攜帶病原體。血清學的診斷還存在滯后性，該方法費時、費力，無法滿足快速、早期診斷的要求。

3）病原體核酸檢測：由于以上兩種方法費時、費力，為了提高檢測速度，可直接從臨床標本（尿道拭子、陰道拭子、尿液）中檢測病原體的核酸。該方法具有快速、準確和高靈敏度等優(yōu)點，能夠?qū)α芮蚓∟G）、解脲支原體(UU)及沙眼衣原體（CT）作出早期診斷，給疫情的快速分析和控制提供有力的技術(shù)支撐。其中的實時定量PCR檢測平臺已成為最簡捷和可靠的淋球菌（NG）、解脲支原體(UU)及沙眼衣原體（CT）檢測方法。

目前產(chǎn)品大部分采取針對淋球菌（NG）、解脲支原體(UU)或沙眼衣原體（CT）單一的檢測方法，對于臨床檢測多種病原體的要求，必須對一個樣本進行多管檢測才能達到，增加了檢測成本和操作繁瑣度。

目前國內(nèi)的核酸診斷中應(yīng)用最為廣泛的是以熒光標記探針為基礎(chǔ)的實時熒光PCR技術(shù)。檢測探針為包括5’端報告基團和3’端淬滅基團的寡核苷酸。當探針完整時，由于淬滅基團靠近報告基團而極大降低了報告基團發(fā)出的熒光。引物延伸時，與模板結(jié)合的探針被Taq酶（5′→3′外切核酸酶活性）切斷，報告基團與淬滅基團分離，產(chǎn)生熒光信號。在每次PCR循環(huán)中，都有新的報告基團被剪切，因此熒光信號強度的增加與擴增產(chǎn)物的數(shù)量成正比。