[發(fā)明專利]miR-17-5p及miR-20a在制備依托泊苷耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310274073.5
• 申請日: 2013-07-02
• 公開（公告）號: CN103520722A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 翁桁游;黃慧琳;周惠;屈良鵠
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61P35/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 謝敏楠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物領(lǐng)域，涉及腫瘤耐藥性診斷和治療，更具體涉及通過檢測標志性微RNA和凋亡調(diào)控蛋白的表達預測腫瘤細胞對化療藥物依托泊苷的敏感性和/或耐受性的方法，以及通過改變miR-17-5p、miR-20a微RNA的表達和Bim-S促凋亡蛋白的表達而降低腫瘤對依托泊苷耐藥性的應用。

背景技術(shù)

化療是腫瘤臨床治療的主要手段之一。然而，腫瘤細胞的耐藥性常常使得化療藥物的療效被大大削弱，其結(jié)果是腫瘤病人對藥物治療不再敏感，并導致腫瘤復發(fā)。因此，在臨床診斷中檢測或預后腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性，并開發(fā)逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性的藥物，是提高化療療效及腫瘤治愈率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

目前研究發(fā)現(xiàn)腫瘤耐藥的分子機制非常復雜，主要包括藥物靶基因突變或擴增、藥物外排作用相關(guān)蛋白表達增強、細胞凋亡途徑異常和DNA損傷修復基因表達增強等。最近的研究表明細胞凋亡和抗凋亡關(guān)鍵途徑的異常是腫瘤耐藥發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵因素之一。由于化療主要是通過誘導凋亡的方式治療腫瘤，因此腫瘤細胞凋亡途徑的缺陷將使得凋亡程序無法被啟動，導致腫瘤細胞對治療產(chǎn)生抗性。腫瘤細胞對化療藥物誘導的凋亡產(chǎn)生抗性主要與以下幾個方面有關(guān)：（1）促凋亡蛋白失活，其中線粒體凋亡途徑的激發(fā)者Bim和執(zhí)行者Bax起著至關(guān)重要的作用。例如，Bax的低表達可導致轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者對化療藥物的抗性以及低生存率。非小細胞肺癌細胞株對紫杉醇誘導的凋亡的敏感性與Bim而非Bcl-2家族其他成員的表達相關(guān)。過表達Bim可以使原本對紫杉醇不敏感的細胞轉(zhuǎn)變成敏感的細胞，而敲低Bim的表達則可以降低紫杉醇誘導的凋亡。類似的結(jié)果在乳腺癌和前列腺癌細胞株中都可以觀察到。另外，Bim的缺失可影響B(tài)MK負瘤小鼠對于紫杉醇的敏感性。（2）過表達抗凋亡基因，如Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1等。（3）p53的缺失或位點突變。

針對腫瘤耐藥產(chǎn)生的原因，逆轉(zhuǎn)耐藥性常用的策略包括對藥物與靶基因結(jié)合的位點進行修飾、采用鈣離子通道阻滯劑、增強細胞凋亡程度等。由于微RNA?（miRNA）對細胞內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄后表達的廣泛調(diào)控，其在腫瘤治療中的應用也是近年來的研究熱點，尤其是微RNA在逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞對化療藥物的耐受性方面表現(xiàn)出了良好的運用前景。例如，在膽管癌病人中miR-21高表達，通過抑制miR-21的表達水平可提高膽管癌細胞對化療藥物吉西他濱的敏感性。在乳腺癌細胞中miR-21的表達高于正常乳腺細胞，用反義寡核苷酸降低MCF-7乳腺癌細胞中miR-21的表達，可以抑制MCF-7的體外和體內(nèi)增殖并提高MCF-7對化療藥物托泊替康的敏感性。關(guān)于微RNA與腫瘤化療耐藥性的相關(guān)性研究正如火如荼，有望為成為逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性的新療法。

依托泊苷又稱VP-16或足葉乙甙，是一種細胞周期特異性的抗腫瘤藥物，主要作用于DNA拓撲異構(gòu)酶II，形成藥物-酶-DNA穩(wěn)定的可逆性復合物從而阻礙DNA修復。依托泊苷被廣泛應用于癌癥的化療方案，但由于化療存在著比較嚴重的骨髓抑制、胃腸道反應和肝腎損傷等，故需與其他藥物聯(lián)合使用。另外，依托泊苷也存在耐藥性問題，通過聯(lián)合用藥不僅可以降低化學藥物的細胞毒性，減少副作用，也能增強化療效果。

研究表明微RNA與依托泊苷的耐藥性密切相關(guān)，在MCF-7/VP-16乳腺癌耐藥細胞中miR-326表達下降，而在多藥耐藥（包括依托泊苷、順鉑、阿霉素等）的小細胞肺癌中miR-134表達下降，這兩個微RNA都是以多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP-1為靶點而起作用的。尋找凋亡相關(guān)的微RNA作為依托泊苷耐藥性診斷的標志物，并通過將微RNA模擬物或抑制劑與依托泊苷聯(lián)合用藥來逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的耐藥性，對腫瘤的個性化診斷和治療具有非常重要的應用價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，提供診斷腫瘤細胞對依托泊苷耐藥性的新試劑和新方法。

本發(fā)明具體的思路是提供了miR-17-5p和/或miR-20a在診斷腫瘤細胞對依托泊苷敏感性和/或耐受性中的應用，Bim-S促凋亡蛋白在診斷腫瘤細胞對依托泊苷敏感性和/或耐受性中的應用；以及逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞對依托泊苷耐藥性的新手段，具體為將miR-17-5p和/或miR-20a的抑制劑與依托泊苷聯(lián)合用于腫瘤治療。