[發明專利]一種鑒定棉花枯萎病抗性的適樂時包衣菌土營養缽法

有效

• 申請號: 201310273718.3
• 申請日: 2013-07-02
• 公開（公告）號: CN103340107A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發明（設計）人: 李志芳;朱荷琴;馮自力;趙麗紅;師勇強
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: A01G7/00
• 分類號: A01G7/00
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

技術領域

本發明涉及植物病理學領域，具體地，本發明涉及一種鑒定棉花枯萎病抗性的適樂時包衣菌土營養缽法。

背景技術

棉花枯萎病是一種世界性的危險病害，和黃萎病被并列成為棉花上的兩大病害，嚴重影響棉花生產，也是棉花入境的檢疫對象。選育抗病品種是防治棉花枯萎病最經濟有效的措施之一。棉花品種和資源材料的抗枯萎病性鑒定是抗病育種的基礎工作。由于枯萎病菌在子葉期即可發病，因此科研工作者往往在棉花苗期開展抗枯萎病性鑒定工作。早期主要采用苗床病圃法，但由于病圃的建立需要相對隔離的環境，還要設置活動防雨遮光棚，受到自然條件的制約較大，所以已被逐漸淘汰。

棉花枯萎病是一種土傳維管束病害，可以在棉花的整個生育期為害，主要癥狀有：黃化型、黃色網紋型、青枯型、紫紅型和皺縮型。在大田條件下，枯萎病在苗期至現蕾期為害都十分嚴重，重病田蕾期可造成大面積死苗，甚至絕產。為了達到快速鑒定的目的，往往選擇苗期鑒定棉花品種和資源材料的枯萎病抗性。但是，如果棉苗管理不當，環境濕度過大或通風不好就會導致苗期病害的發生，因此選用防治苗病、而又對枯萎病發生無影響的藥劑拌種，就可以降低苗病危害，使得試驗結果準確可靠。目前，普遍依據國家標準（GB/T22101.4-2009）采用紙缽土壤接菌盆栽法，對棉花品種（系）進行抗枯萎病鑒定，但是，由于標準中菌土濃度過高，用多菌靈拌種等原因，可操作性不強，重復性差，導致試驗結果不可靠。

枯萎病菌的接種量是苗期鑒定棉花品種和資源材料抗病性的關鍵環節，決定發病時間的早晚和輕重。此外，還必須考慮環境溫度、濕度和光照條件的控制及抗病和感病對照的設置等因素。

發明內容

本發明的目的是建立一種鑒定棉花枯萎病抗性的適樂時包衣菌土營養缽法。

發明的鑒定棉花枯萎病抗性的適樂時包衣菌土營養缽法包括以下步驟：

1）病原菌的培養，將棉花枯萎病菌接種至查比克液體培養基中培養，再轉接到玉米沙土培養基中；

2）制備枯萎菌土營養缽，在生砂壤土中混入質量百分比為0.6%的棉花枯萎菌玉米沙土培養物，裝入無底紙缽中；

3）播種及棉苗管理，1%的適樂時（2.5%咯菌腈(國際通用名Fludionil)懸浮種衣劑）包衣，播種，并在可控溫控濕的日光溫室中培養棉苗；

4）評價棉花枯萎病抗性，分級調查病害發生情況，計算病情指數。

根據本發明的具體實施方式，所述鑒定棉花枯萎病抗性的適樂時包衣菌土營養缽法包括以下步驟：

1）枯萎病菌的培養，將棉花枯萎病菌菌種接種至查比克液體培養基振蕩培養，然后再轉接入玉米沙土培養基靜置培養；

2）棉花枯萎病菌菌土基質的制備和營養缽的制作，將在太陽下暴曬過2-3天的生砂壤土中混入一定質量百分比的棉花枯萎菌的玉米沙土培養物，充分混合均勻，分裝到無底紙缽中；

3）最佳接種濃度的確定，苗期鑒定中適量接種是關鍵技術之一，由于棉花枯萎病抗性鑒定往往都是多批次試驗，為了使各批試驗之間的結果具有可比性，一般選用相對病情指數來評價棉花品種（系）的抗病性，當感病對照的實際病指在40.0～66.7之間的時候，將其相對病指校正到50才較為可靠。枯萎病菌菌土接種濃度過低會減輕病害的發生且發病不均勻，而濃度過高則會影響出苗率，造成出苗遲緩，還會導致病害過重，實際病指高出閾值66.7，不能準確評價棉花品種和材料的抗病性。綜合出苗率和發病情況的結果，使用的枯萎病菌培養物接種濃度為0.6%。

4）適樂時包衣，并培養棉苗。培育健壯整齊的棉苗是苗期抗病鑒定的最基本要求，也是保證鑒定準確的前提。在最適濃度枯萎菌土接種濃度下（0.6%），為了提高棉苗的出苗率，選用防苗病藥劑（1%適樂時）包衣，冀棉11、中棉所45和中植棉2號的出苗率分別是100%，100%和88.9%，略高于溫湯浸種。枯萎病情指數為52.2、18.9和9.1。而采用國家標準中所述的5%多菌靈拌種，各品種的出苗較好，但是發病極顯著減輕，感病品種冀棉11的病情指數僅為23.1，遠遠低于閾值40.0，說明5%多菌靈對枯萎病的發生有明顯的抑制作用，不可選用多菌靈包衣。棉花苗期抗枯萎病性鑒定對溫度的要求較為嚴格，要求日平均溫度26℃左右，適宜發病的溫度為20℃～32℃。鑒定要求有相對較高的濕度，土壤相對濕度為60%以上較為合適，并且要均勻一致。試驗還要求有良好的光照，在春秋季節，日光溫室的光照一般均可達到要求。