[發明專利]一種含聯合佐劑的結核亞單位疫苗

有效

• 申請號: 201310273393.9
• 申請日: 2013-07-02
• 公開（公告）號: CN103386128B
• 公開（公告）日: 2017-02-08
• 發明（設計）人: 王國治;盧錦標;都偉欣;陳保文;楊蕾;蘇城;沈小兵
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/04;A61P31/06
• 代理公司: 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙)11341
• 代理人: 王加嶺

技術領域

本發明涉及一種結核亞單位疫苗，具體涉及一種以Ag85b蛋白和ESAT6-CFP10融合蛋白為抗原成份，以鋁和Poly?IC為復合佐劑的新型亞單位疫苗。

背景技術

結核病是由結核分枝桿菌引起的一種古老而漫長的感染性疾病。近幾年，隨著結核分枝桿菌多重耐藥性菌株的增多和艾滋病的不斷流行，使結核病死灰復燃。結核病已經成為危及全球的公共衛生問題。

世界衛生組織于2012年公布了全球結核病狀況報告，報告中顯示2011年全球有870萬新發結核病病例，140多萬結核病死亡病例。從報告中可以看出結核病的發病、患病和死亡總數依然很高，造成的經濟負擔很重。我國是世界第二大結核病高負擔國家，結核病患病人數多，并且每年因結核病導致的死亡人數也列于傳染病死亡人數之首。世界衛生組織報道全球有1/3的人群感染了結核桿菌，即中國擁有4億多的龐大的結核桿菌感染者。發病率高、耐藥率高、因病死亡人數多、潛伏感染人群數量龐大，以上情況是中國結核病的疫情現狀，由此可見中國的結核病疫情仍十分嚴重。針對此種疫情狀況，有效地控制和預防結核病的發生有可能改變結核病流行現狀。防控結核病最根本的途徑可能還要依賴有效的結核病疫苗。到目前為止，卡介苗仍是預防結核唯一可用的疫苗。但在世界各國進行的數十次臨床試驗結果顯示，卡介苗對成人肺結核的免疫保護力是0%～80%，對抑制潛伏期結核的復發毫無作用，因此研制新型結核疫苗十分必要。新型結核病疫苗不僅要對新生兒提供良好的預防作用，對于成年人和結核桿菌潛伏感染者也要起到預防作用。

重組結核桿菌亞單位疫苗，特別是大腸桿菌中表達的亞單位疫苗，具有保護性抗原表位多、表達效率高、發酵工藝成熟、生成成本低、易于大規模生產及廣泛使用和再次使用的特點。并且亞單位疫苗具有較高的安全性、易于被人們接受。但亞單位疫苗的主要缺點是免疫原性弱，往往需要有效的佐劑輔助才能引起理想的免疫應答。目前鋁佐劑是應用最廣泛的一類疫苗佐劑，但對于亞單位疫苗誘發理想的免疫應答反應效果欠佳。

發明內容

基于上述佐劑誘發免疫應答效果欠佳的問題以及對新型疫苗的迫切需求，本發明將具有不同特點的結核桿菌抗原相組合，并添加篩選出的適當的佐劑，制成了含聯合佐劑的新型結合亞單位疫苗。

為了實現本發明目的，本發明采用如下技術方案：

本發明選用Ag85b蛋白和ESAT6-CFP10融合蛋白作為亞單位疫苗的保護性抗原以及選用鋁和Poly?IC作為復合佐劑。

本發明中的Ag85b蛋白和ESAT6-CFP10融合蛋白均屬于結核桿菌保護性抗原，作為疫苗成分免疫人體后，刺激機體產生對這兩種成分的特異性細胞免疫，當有結核桿菌進入或潛伏于人體時，這種較強的細胞免疫可以抑制結核桿菌的增值或促進其清除，對結核病的預防起重要作用。本發明將Ag85b蛋白和ESAT6-CFP10融合蛋白聯合使用均能發揮各自的抗原作用，它們組成的疫苗，適用于結合桿菌潛伏感染者的治療。

在亞單位疫苗中，佐劑是提高免疫活性的重要成分，本發明篩選出的新型聯合佐劑為鋁和Poly?IC的聯合佐劑。

優選，Ag85b蛋白、ESAT6-CFP10融合蛋白、鋁佐劑和Poly?IC佐劑的重量比為1～50:1～50:100～1000:1～100。

更優選，Ag85b蛋白、ESAT6-CFP10融合蛋白、鋁佐劑和Poly?IC佐劑的重量比為10:10:200:50。

在應用時，一個劑量疫苗中含Ag85b蛋白1～50μg、ESAT6-CFP10融合蛋白1～50μg、鋁佐劑0.1～1mg和Poly?IC佐劑1～100μg，優選一個劑量疫苗中含Ag85b蛋白10μg、ESAT6-CFP10融合蛋白10μg、鋁佐劑200μg和Poly?IC佐劑50μg。鋁佐劑可以是但不限于氫氧化鋁、磷酸鋁。

Poly?IC選自聚肌苷酸：聚胞苷酸，聚脫氧肌苷酸：聚胞苷酸，聚肌苷酸：聚脫氧胞苷酸或聚脫氧肌苷酸：聚脫氧胞苷酸。

本發明中的Poly?IC是一種高效的干擾素誘生劑，在體內可以產生類似病毒感染的免疫反應，可誘導CD4⁺和CD8⁺T細胞，增強細胞免疫和體液免疫應答。研究發現，Poly?IC在豬體內能有效地誘導IFN-γ的產生，同時可以誘導單核細胞MHC-II和CD80/CD86的基因表達以及趨化因子、TLR-5、TLR-9、IL-12和p35的產生，證明其可以有效增強Th1型反應。鋁佐劑是目前應用最廣泛的一類疫苗佐劑，其安全性已被驗證和認可，并且具有緩釋作用，對疫苗的持續釋放實現緩釋給藥有幫助，因此本發明的鋁佐劑可以發揮上述優勢。