[發明專利]培育穩定表達COE蛋白的轉基因玉米的方法及其專用基因

有效

• 申請號: 201310272134.4
• 申請日: 2013-07-01
• 公開（公告）號: CN103387998A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 王金洛;張曉東;薛靜;楊兵;楊鳳萍;滿坤
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N15/50
• 分類號: C12N15/50;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 劉春成;張向琨

技術領域

本發明涉及一種培育穩定表達COE蛋白的轉基因玉米的方法及其專用基因，其以玉米為生物反應器來高效表達PEDV-COE蛋白。

背景技術

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒(porcine?epidemic?diarrhea?virus,PEDV)引起的一種豬的急性高度接觸性腸道傳染病，其主要特征為嘔吐、腹瀉和脫水，各種年齡和品種的豬均易感，尤其對哺乳仔豬危害最為嚴重，發病率高達100％，死亡率為30％-80％，是導致仔豬早期死亡的主要疫病之一。1971年英國首次報道了本病的發生，隨后在比利時、德國等許多國家均有報道，在我國1976年首次被報道，到目前為止，歐洲和亞洲的許多養豬國家都有該病的報道，該病已經成為影響養豬業的重要腹瀉病之一。

PEDV為單鏈正股RNA病毒，屬于尼多病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬。S蛋白是位于病毒粒子表面的纖突糖蛋白，包含S1和S2兩個結構域，其中的S1結構域包含主要的中和抗原表位，在S蛋白介導的免疫反應中發揮重要作用，S.H.Chang,M.Duarte等(S.H.Chang,J.L.Bae,T.J.Kang.Identification?of?the?epitope?region?capable?of?inducing?neutralizing?antibodies?against?the?porcine?epidemic?diarrhea?virus.Mol.Cells,2002,14:295–299;M.Duarte,H.Laude.Sequence?of?the?spike?protein?of?the?porcine?epidemic?diarrhoea?virus.J.Gen.Virol.1994,75:1195–1200.)根據PEDV抗原中和表位的核苷酸序列分析，PEDV主要中和抗原表位（core?neutralizing?epitope,COE）位于S1區的499-638位氨基酸之間，能夠刺激機體產生中和抗體。

PEDV經口鼻感染后，只引起腸道局部感染，主要侵害小腸絨毛上皮細胞（Debonck?P,Pensaert?M.Experimental?Infection?of?Pigs?with?a?New?Porcine?Enteric?Coronavirus-CV777.Am?J?Vet?Res,1980,2:219-223），感染的上皮細胞采用電鏡觀察可見絨毛減少或縮短，細胞漿破裂，在胞漿的空泡內或滑面內質網中可見到病毒粒子。對于這種腹瀉性疾病，通過口服免疫從腸道直接阻斷病毒與受體的結合最為方便有效。目前生產上主要采用滅活疫苗和弱毒疫苗免疫，但滅活疫苗免疫劑量較大，免疫效果較差，而弱毒疫苗存在毒力返強或散毒的潛在危險。