[發明專利]雜交瘤細胞株及其應用

無效

• 申請號: 201310270514.4
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN103484434A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 朱艮苗
• 申請（專利權）人: 朱艮苗
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/24;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 秦力軍

技術領域

本發明屬于蛋白領域，特別涉及單克隆抗體的制備。

背景技術

α干擾素，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節作用。α干擾素的免疫調節作用很強，還有增強免疫對病毒感染細胞的免疫殺傷活性。α干擾素還能增強巨噬細胞的吞噬功能和細胞毒活性。臨床治療劑量為300萬～500萬單位，每周3次，療程3～6個月。持久療效為25％～40％。常見的不良反應為流感樣癥狀，如：發熱、頭痛、關節及肌肉酸痛等。聚乙二醇干擾素是相對于常規干擾素在藥代動力學和用藥頻次上有很大改進的一種干擾素，臨床研究結果顯示聚乙二醇干擾素在治療慢性乙型肝炎方面顯示出了令人鼓舞的效果。α干擾素至少有15個亞型，彼此之間有78-98％的同源性，其均能和I型受體結合。每種亞型之間，因其自身結構的微小差異而導致各自的生物活性差異。

α干擾素的單抗在研究細胞因子的功能上有許多用途。如結構與功能的研究，定性和定量的檢測，及純化工藝。α干擾素的高同源性為單抗的應用提供了廣闊的空間，但是，α干擾素的高同源性也提高了制備雜交瘤細胞和單抗難度。

另外，傳統α干擾素活性檢測法為細胞病變抑制法，該方法耗時多，結果可重復性差。操作要求較高，投入較大，且具有生物危險性。

另外，仍有部分患者對IFN治療無反應或僅有短暫反應后再次復發。原因之一與機體產生了抗干擾素的抗體，特別是能夠中和IFN生物學活性的中和抗體(NA)有關。國內有關生物學方法測定IFN-α中和抗體的研究不多。

本發明是針對上述問題改進得到的。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供雜交瘤細胞，其能穩定分泌α干擾素單克隆抗體。本發明的目的之二在于提供α干擾素單克隆抗體及其應用，單克隆抗體效價高；本發明的目的之三在于提供診斷試劑盒及其應用方法，其可以用于檢測α干擾素；該方法操作簡單，適用于大批量的臨床檢測。

分泌α干擾素單克隆抗體的雜交瘤細胞，所述生物保藏編號為CCTCC?NO：C201242。

由所述的雜交瘤細胞分泌的α干擾素單克隆抗體。

所述的α干擾素單克隆抗體制備檢測α干擾素的診斷試劑中的應用。

含有酶標所述的α干擾素單克隆抗體的診斷試劑盒，所述診斷試劑盒包括：固相載體，用于包被所述固相載體的抗體，能與檢測抗原結合的酶標抗體，顯色底物，洗滌液和封閉液，所述用于包被所述固相載體的抗體為抗α干擾素多克隆抗體，所述酶標抗體為酶標α干擾素單克隆抗體。

進一步，所述顯色底物為TMB，所述酶標抗體為HRP標記的α干擾素單克隆抗體。

檢測α干擾素的方法，具體包括以下步驟：

A含有包被抗體的固相載體的制備

將抗α干擾素多克隆抗體包被至固相載體上，用洗滌液洗去雜質；

B孵育

將樣本添加至固相載體中，與所述α干擾素單克隆抗體孵育至充分結合，形成抗原-抗體結合物；將所述酶標抗體與所述抗原-抗體結合物孵育至充分結合，洗去雜質；

C檢測

加入顯色底物，檢測光強度。

進-步，所述的檢測α干擾素的方法，步驟A中，所述α干擾素多克隆抗體的包被濃度≥2μg/mL。

進一步，所述的檢測α干擾素的方法，步驟B中，所述樣本為血清作50倍體積稀釋；進一步，所述的檢測α干擾素的方法，所述方法設置有同樣本平行的標準品組、陽性對照組、陰性對照組和空白對照組；進一步，所述的檢測α干擾素的方法，檢測OD₄₅₀值。

含有所述的α干擾素單克隆抗體的診斷試劑盒，所述診斷試劑盒包括：固相載體，用于包被所述固相載體的抗體，能與檢測抗原結合的酶標抗體，顯色底物，洗滌液和封閉液，所述用于包被所述固相載體的抗體為所述的單克隆抗體，所述酶標抗體為酶標α干擾素多克隆抗體。

兩種抗體的聯合應用，抗α干擾素多克隆抗體作和酶標的所述α干擾素單克隆抗體聯合在檢測α干擾素的間接競爭ELISA法的應用。

本發明的有益效果在于：1)本雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體效價高；2)所制備的單克隆抗體，被HRP標記后，可作為酶標抗體；3)所述單克隆抗體可作為包被抗體；4)用制備的單克隆抗體制備的ELISA試劑盒，特異性高，縮短檢測時間，提高試驗準確性，可大規模檢測，投入小。達到更加方便快捷檢測干擾素活性的目的。5)本單克隆抗體效價高可檢測中和抗體，并進一步判斷患者對IFN治療無反應或復發的可能行。

附圖說明