[發明專利]短穩桿菌GXW15-4野外馴化提純方法無效

申請號：	201310269195.5	申請日：	2013-07-01
公開（公告）號：	CN103333831A	公開（公告）日：	2013-10-02
發明（設計）人：	高小文	申請（專利權）人：	鎮江市潤宇生物科技開發有限公司;高小文
主分類號：	C12N1/20	分類號：	C12N1/20;C12N1/36;A01P7/04;C12R1/01
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地址：	212009 江***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	桿菌 gxw15 野外馴化提純方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及對中國典型培養物保藏中心保藏的短穩桿菌（拉丁文學名為Empedobacter?brevis）GXW15-4進行野外馴化、提純，使之保持較高的殺蟲活性，制備成適合短穩桿菌殺蟲劑產業化生產用原種的方法，屬于微生物技術領域。?

背景技術

植物的主要害蟲是鱗翅目害蟲。長期使用化學農藥不僅導致農產品化學殘留量加大，而且導致害蟲對化學農藥的抗藥性增強，藥效顯著降低。例如，大劑量的常規化學殺蟲劑對蔬菜小菜蛾、斜紋夜蛾、水稻縱卷葉螟等主要鱗翅目害蟲的殺蟲效果也只有60%甚至更低，農產品生產者和消費者因此對化學農藥的使用普遍擔憂。?

就對化學農藥抗藥性較強的小菜蛾、斜紋夜蛾、水稻縱卷葉螟等重大鱗翅目害蟲的生物農藥開發應用而言，國內外市場上主要產品仍然是50年前由日本人研究制造成功的蘇云金桿菌殺蟲劑（BT），長期使用也出現藥效下降趨勢。短穩桿菌殺蟲劑是本公司自主開發成功的一種全新的細菌性殺蟲劑，國內外首創，截止2013年3月已取得國家新農藥全部生產許可證，同時取得中國綠色食品生產資料證書，現已正式投產，有希望成為蘇云金桿菌殺蟲劑（BT）理想的替代產品。?

需要指出的是：近年來，國內外農藥市場上出現了一些植物源殺蟲劑品種，但因植物源殺蟲劑受植物品種和資源限制，產業化生產難度較大，且因植物源殺蟲劑開發成本普遍較高，農戶選擇使用植物源殺蟲劑的積極性不高。?

發明內容

短穩桿菌Empedobacter?brevis（菌株號：GXW15-4）是鎮江市潤宇生物科技開發有限公司高級農藝師高小文于2001年9月解剖罹病死亡的斜紋夜蛾尸體發現的一種植物害蟲病原菌。該菌于2002年12月11日保藏在中國典型培養物保藏中心（簡稱CCTCC），保藏編號CCTCC?NO：M202046，保藏單位地址：武漢市武昌區珞珈山武漢大學。?

短穩桿菌GXW15-4個體形態特征為：菌體呈短桿狀，長2.6-3.8μm，寬0.8-1.1μm，兩端鈍圓，無鞭毛，用掃描電鏡觀察其內部有約1μm³的正方晶體狀。?

依據中國科學院微生物研究所檢測鑒定報告（[2009]微檢字第175號），短穩桿菌GXW15-4理化試驗結果見表1：?

表1??短穩桿菌農藥理化試驗結果（BIOLIG?GN2）表

短穩桿菌GXW15-4再生能力強，可在工廠化條件下大量繁殖，但在重復繁殖過程中往往會出現其殺蟲活性下降現象。本發明是通過對中國典型培養物保藏中心保藏的短穩桿菌GXW15-4進行野外馴化、提純手段保持其具有較高的殺蟲活性、獲得可以適合短穩桿菌殺蟲劑產業化生產的優良菌種的一種方法。

本發明的產物是獲得可以用于工廠化生產短穩桿菌殺蟲劑的短穩桿菌GXW15-4原種。?

???具體實施方式

1、短穩桿菌GXW15-4野外馴化方式

野外馴化短穩桿菌GXW15-4步驟如下：

步驟一、在晴天室外溫度37⁰C以上的夏季烈日下，將短穩桿菌殺蟲劑按常規用藥方法噴施在有4齡以上小菜蛾或者斜紋夜蛾幼蟲的田間植物體上，噴施在植物體上的短穩桿菌GXW15-4經白天紫外線照射后，讓小菜蛾或者斜紋夜蛾高齡幼蟲在夜間捕食并經口進入其體內；

步驟二、選擇藥后2天內死亡的小菜蛾或者斜紋夜蛾高齡幼蟲尸體，曬干備用；

步驟三、將干癟的小菜蛾或者斜紋夜蛾幼蟲尸體粉碎后均勻撒布于無菌瓊脂培養皿中培養24小時，獲得野外馴化1次、含有高濃度短穩桿菌GXW15-4的混合物質；

步驟四、將獲得的混合物質稀釋，按照前（1）～（3）的步驟重復2次以上，獲得野外馴化3次以上、含有高濃度短穩桿菌GXW15-4的混合物質。