[發(fā)明專利]從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法

無效

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• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN103333869A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李海航;林佳;劉潔;倪賀
• 申請（專利權(quán)）人: 華南師范大學(xué)
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08
• 代理公司: 北京市立方律師事務(wù)所 11330
• 代理人: 劉延喜;王增鑫

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)的制備和提取技術(shù)，尤其涉及一種從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法。

背景技術(shù)

據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織統(tǒng)計，我國甘薯的種植面積達(dá)368萬hm²，占世界甘薯總面積的60%左右，總產(chǎn)量為0.81億噸，占世界總產(chǎn)量的80%左右。由于甘薯的大面積種植，產(chǎn)生了大量的副產(chǎn)品——甘薯的莖和葉。我國年產(chǎn)甘薯莖700億千克，甘薯葉720億千克。

甘薯的莖和葉含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)，粗蛋白含量高達(dá)16.5-17.1%，高于大米、大麥的含量，與玉米的含量相接近，還含有豐富的維生素A、B、C及礦物質(zhì)鐵、鈣等，被亞洲蔬菜研究中心譽(yù)為“蔬菜皇后”。我國部分地區(qū)將甘薯的嫩莖葉作為蔬菜食用。農(nóng)戶將甘薯莖葉和甘薯塊根用作飼料。但這些用量都比較少，且營養(yǎng)成分利用率低。目前，大部分的甘薯莖葉被作為廢物丟棄，造成了大量的資源浪費(fèi)，同時也造成了環(huán)境污染。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是，為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以甘薯的莖和葉為原料制備高活性過氧化物酶的方法，將甘薯的莖和葉作資源化利用，變廢為寶，提高甘薯產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)價值。

為達(dá)到以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法，其包括以下步驟：

（1）準(zhǔn)備新鮮的甘薯的莖部和/或葉片部分；

（2）將所述甘薯的莖部和/或葉片部分與其0.5～2.5倍體積的提取液進(jìn)行勻漿，浸提，分離上清和沉淀，其上清為過氧化物酶粗提液；

（3）在所述過氧化物酶粗提液中加入固體硫酸銨至飽和濃度為40%～90%，或加入有機(jī)溶劑至其終濃度為50%～80%，沉淀酶蛋白，分離上清和沉淀，其沉淀為過氧化物酶；

（4）將所述步驟（3）獲得的過氧化物酶干燥保存。

具體地，所述步驟（2）中的提取液為自來水、蒸餾水、去離子水或磷酸鹽緩沖液的任意一種；浸提時間為1小時。

進(jìn)一步地，所述步驟（3）中的有機(jī)溶劑為乙醇或丙酮；沉淀時間為1小時。

更進(jìn)一步地，所述步驟（4）的干燥方法為冷凍干燥、真空干燥或噴霧干燥的任意一種。

優(yōu)選地，所述步驟（2）～（4）在4℃或室溫下進(jìn)行。

更優(yōu)地，還包括步驟（5），將所述步驟（3）中的有機(jī)溶劑進(jìn)行回收。具體地，其采用減壓蒸餾回收所述有機(jī)溶劑。

與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明具有如下優(yōu)勢：

a)本發(fā)明設(shè)備投資少，操作簡單，產(chǎn)品生產(chǎn)成本低，便于大規(guī)模生產(chǎn)；

b)生產(chǎn)過程無污染，低能耗，零排放。有機(jī)溶劑可用減壓蒸餾等方法完全回收重復(fù)利用，蒸餾后的干物質(zhì)（主要為可溶性糖類）作為副產(chǎn)品，可作動物或微生物營養(yǎng)，甘薯莖葉渣可用于飼料或有機(jī)肥料生產(chǎn)；

c)本發(fā)明高效利用了甘薯莖和葉類廢棄物，變廢為寶，提高了甘薯的開發(fā)利用價值和產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益；

d)經(jīng)過氧化物酶活性測定，甘薯莖和葉中的過氧化物酶具有高活性，可用作制備高活性過氧化物酶的原料。

附圖說明

圖1為本發(fā)明從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法的流程圖。

圖2為用本發(fā)明從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法從甘薯的不同的器官提取的過氧化物酶的酶活性對比圖。

圖3為本發(fā)明從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法中在不同濃度的硫酸銨下過氧化物酶的沉淀情況對比圖。

圖4為本發(fā)明從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法中在不同濃度的乙醇下過氧化物酶的沉淀情況對比圖。

圖5為本發(fā)明從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法中在不同濃度的丙酮下過氧化物酶的沉淀情況對比圖。

圖6為本發(fā)明從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法所獲得的過氧化物酶粉末的純度測定情況。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

如圖1的流程圖所示，本發(fā)明從甘薯的莖和葉中提取和制備過氧化物酶的方法的具體步驟如下：

（1）準(zhǔn)備100g新鮮的甘薯的莖部和/或葉片部分；

（2）將所述甘薯的莖部和/或葉片部分與其固液比為1:1的磷酸鹽緩沖液勻漿，浸提1小時后，經(jīng)離心或過濾后獲得過氧化物酶粗提液；

（3）在所述過氧化物酶粗提液中加入固體硫酸銨至飽和濃度為40%～90%，或加入乙醇或丙酮至其終濃度為50%～80%，沉淀1小時后，分離上清和沉淀，其沉淀為過氧化物酶；