[發明專利]含內標的單核細胞增生李斯特氏菌LAMP檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310268744.7
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN103320435A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 石磊;趙一鳴;王珊珊;李艷莉;張志剛;蘇永裕;孟赫誠;閆鶴
• 申請（專利權）人: 華南理工大學;廈門銀祥集團有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;蘇運貞

1.一種含內標的單核細胞增生李斯特氏菌的LAMP引物組，其特征在于包含檢測引物組及內標引物組；

所述的檢測引物組包括一對外引物、一對內引物和一對環引物，其核苷酸序列分別如下所示：

LMhly-F3：ATTAGTATACCACGGAGATGC；

LMhly-B3：TCCACTAATGTATTTACTGCGT；

LMhly-FIP：

GAATTCGCTTTCACGAGAGCGCAGATATCCAAGTTGTGAATG；

LMhly-BIP：

CAACCCGATGTTCTTCCTGTCACTTGATTAGTCATTCCTGGCA；

LMhly-LF：ACCTGGATATGTTAGGCTCG；

LMhly-LB：CGTGATTCATTAACACTTAGCA；

所述的內標引物組包括一對外引物、一對內引物和一對環引物，其核苷酸序列分別如下所示：

LMprfA-F3：TGAACGCTCAAGCAGAAG；

LMprfA-B3：AGCTAGACTGTATGAAACTTGT；

LMprfA-FIP：

TGATGGTCCCGTTCTCGCTACCAATGGGATCCACAAGAAT；

LMprfA-BIP：

TGATACAGAAACATCGGTTGGCTTGATAACGTATGCGGTAGC；

LMprfA-LF：TACTCGTGAGCTTTGTGATACC；

LMprfA-LB：TTAGAAGTCATTAGCGAGCAG。

2.一種含內標的單核細胞增生李斯特氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于由以下成分組成：權利要求1所述的含內標的單核細胞增生李斯特氏菌的LAMP引物組；DNA聚合酶；LAMP反應液；核酸熒光染料；內標；陽性對照和陰性對照；

所述DNA聚合酶為Bst?DNA聚合酶；

所述LAMP反應液含有8mM?dNTP、10×ThermoPol反應緩沖液和120mMMgSO₄水溶液三種成分；

所述的核酸熒光染料為10×SYBR?Green?I；

所述的內標為含有單核細胞增生李斯特氏菌prfA基因片段的T載體克隆；

所述的陽性對照為含有單核細胞增生李斯特氏菌LMhly基因片段的T載體克隆；

所述的陰性對照為超純水。

3.根據權利要求2所述的含內標的單核細胞增生李斯特氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述的含有單核細胞增生李斯特氏菌prfA基因片段的T載體克隆通過下述方法制備：以分離鑒定的單核細胞增生李斯特氏菌為模板，利用內標引物組的外引物SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:8進行擴增，所得prfA基因擴增片段序列，回收該擴增片段，利用常規方法連接到T載體中，獲得含有單核細胞增生李斯特氏菌prfA基因片段的T載體克隆。

4.根據權利要求2所述的含內標的單核細胞增生李斯特氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述的含有單核細胞增生李斯特氏菌LMhly基因片段的T載體克隆通過下述方法制備：以分離鑒定的單核細胞增生李斯特氏菌為模板，利用檢測引物組的外引物SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2進行擴增，所得hly基因擴增片段序列，回收該擴增片段，利用常規方法連接到T載體中，即為含有單核細胞增生李斯特氏菌LMhly基因片段的T載體克隆。

5.根據權利要求2所述的含內標的單核細胞增生李斯特氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述的含內標的單核細胞增生李斯特氏菌的LAMP引物組中，檢測引物組及內標引物組的引物濃度比例為：外引物、內引物、環引物的摩爾比為：1-2：4-8：2-4。

6.根據權利要求2所述的含內標的單核細胞增生李斯特氏菌LAMP檢測試劑盒，其特征在于：所述LAMP反應液中8mM?dNTP、10×ThermoPol反應緩沖液和120mM?MgSO₄水溶液三者的體積比是7：4：3。