[發明專利]虎眼萬年青干細胞系形成層與抗癌組合物的提取制備方法

無效

• 申請號: 201310267535.0
• 申請日: 2013-07-01
• 公開（公告）號: CN103320378A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 林樹芳
• 申請（專利權）人: 林樹芳
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A23L1/29
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是涉及虎眼萬年青干細胞系形成層與抗癌組合物的提取制備方法。

背景技術

作為生物工程學技術中的植物干細胞培養方法被世界生物界評價為不會誘發環境問題，且作為可穩定的供給植物來源有用的物質最理想的技術。根據韓國公開專利：1995-0000870(1995.01.03)；2008801112079(2008.10.10)；2010800289223(2010.05.26)。

從各種植物細胞系培養有價值的物質與從植物中直接提取生產方法相比之下有許多的優點，尤其是與以往的提取方法不同，它不受外部環境的影響，可持續大量的培育和生產，被認為是可解決如生態系統被破壞的問題最好的方法。但是，盡管也有對于植物細胞培養的企業對此生物工程的關心與努力，真正產業化的成功例還為數不多，尤其是那些具有較強抗癌活性而較稀缺植物資源的細胞培育與大量擴增更不為多見。這是因為，在多種復雜的細胞培養中，離體材料的褐化、細胞增殖與生產過程中細胞變異仍是失敗的主要原因。

在植物全息、全能表達系統中和在利用植物細胞中，諸多的植物細胞分化組織，例如枝葉、莖、種子、根系等都是以喪失分裂能力的永久組織，所以，為將轉變為具有分裂能力的細胞系必需先進行脫分化過程。所述脫分化過程是指用植物體的一種組織或某器官培養時，解決組織或細胞已經施行特定功能而分化的狀態。即使這樣的脫分化過程中由染色體變異還會出現細胞系的嚴重變異壞象。尤其是通過植物細胞培養生產過程中，只要能保證在長期培養期間穩定的維持較快細胞增殖與高的代謝物質時，其生產能力方可產業化。能夠克服變異問題，在通過植物細胞培養有較高應用價值的物質生產中，獲得遺傳穩定的細胞系最佳工藝及方案是切實可行的。

對此，本發明中參考了只利用植物的莖采集的形成層而誘導愈傷組織的方法(韓國注冊專利第0533120號)，但此注冊專利僅是簡單地描述利用木本或多年生草本植物的莖或果實(韓國專利：2010800289312[2010.05.28])的形成層誘導了愈傷組織。愈傷組織是脫分化發生后形成的組織，對此所述專利其方法仍存有由脫分化的細胞產生變異的問題。

但是，屬于百合科的虎眼萬年青植物的球莖進行離體培養其細胞系也仍然要去解決其脫分化的變異問題，以獲取可穩定增殖的遺傳穩定性高的細胞系。虎眼萬年青的球莖為球狀形，因其鱗片緊抱，數十片相摞狀，尤如洋蔥或百合。虎眼萬年青的傳代增殖是從球莖的外圍邊沿長出一個小圓珠狀的幼生體，其形狀類似老虎的眼睛，故名為虎眼萬年青，而又因其球狀，鱗莖似葫蘆樣，所以又稱為葫蘆蘭植物。

虎眼萬年青中含有30多種皂甙、多糖、黃酮等食藥兼具化合物，尤其是皂甙化合物對抑制二十多種腫瘤具有極強的抗癌活性，而且其抗癌活性較比紫杉醇以及其它生物堿類高出30-100倍，被世界醫藥界稱為癌癥的克星。在我國虎眼萬年青是從70年代從非洲引進品種，直到現在為止，仍然將其作為花卉觀賞用。目前我國僅南方幾省區的花卉苗園有零星小量栽培，要作為大量的制藥和應用于臨床，還存在著原料難求的局面。

對此，本發明人分離虎眼萬年青植物的形成層來源的干細胞。虎眼萬年青植物有其自身干細胞的版本，形成層未分化的細胞組織，可以發育成幾乎所有細胞類型。為提供其較高食藥用價值的細胞系，分離虎眼萬年青植物形成層來源的干細胞，并能夠穩定增殖所述的干細胞，并確認為培養時無變異，利用先進的工藝提取，制備具有較強抗癌活性的功能性食品的組合物，從而完成了本發明。

發明內容

本發明的目的是提供虎眼萬年青干細胞系形成層的培養，以其國內外現有的技術相比，具有防止細胞變異和離體材料褐化等技術解決難題。

本發明的一個目的是提供虎眼萬年青干細胞系形成層培養與提取方法。

本發明的另一目的是提供虎眼萬年青干細胞系形成層與抗癌組合物的制備方法。

本發明的又一目的是提供虎眼萬年青干細胞系形成層與抗癌組合物預防和治療癌癥的方法。

本發明別的特征及實施方式將通過以下詳述及隨附的權利要求書中更加明晰。

1、本發明的選材：

具有極強抗癌作用的虎眼萬年青屬多年生草本植物，開白色的花，其球莖內含30多種皂甙化合物、多糖、黃酮等食藥兼具的成分，尤其是皂甙成分對預防變異的細胞轉癌和抑制癌細胞生長與復制有極為顯著的效果，而且毒性甚微，比食用人參還要安全得多。因此，選用虎眼萬年青的球莖作為本發明植物干細胞系形成層的培養材料。

2、固態培養基的組成成分：

(1)可選擇的無機鹽：