[發明專利]L-雜環氨基酸的合成方法及具有其的藥物組合物

有效

• 申請號: 201310264888.5
• 申請日: 2013-06-27
• 公開（公告）號: CN103276025A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 洪浩;鄭長勝;郭莉娜
• 申請（專利權）人: 凱萊英醫藥集團（天津）股份有限公司;凱萊英生命科學技術（天津）有限公司;天津凱萊英制藥有限公司;凱萊英醫藥化學（阜新）技術有限公司;吉林凱萊英醫藥化學有限公司
• 主分類號: C12P13/04
• 分類號: C12P13/04;C12N15/53;C12N15/63;A61K31/381;A61K31/444;A61K31/4409;A61K31/4402;A61K31/4406;A61K31/415
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 吳貴明;張永明

1.一種L-雜環氨基酸的合成方法，其特征在于，包括：

步驟A，制備雜環酮酸，其中，所述雜環酮酸中的雜環選自五元單雜環五元單雜環、六元單雜環、七元單雜環、五元烷基取代單雜環、六元烷基取代單雜環和七元烷基取代

單雜環中的任一種，所述雜環酮酸中的酮酸基的結構式為且位于所述雜環的任一碳位上；

步驟B，將所述雜環酮酸與甲酸銨、苯丙氨酸脫氫酶、甲酸脫氫酶以及輔酶NAD⁺混合，進行還原氨基化反應，生成L-雜環氨基酸，其中，所述苯丙氨酸脫氫酶的氨基酸序列為SEQ?ID?No.1。

2.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，編碼所述苯丙氨酸脫氫酶的基因序列為SEQ?ID?No.2。

3.根據權利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述苯丙氨酸脫氫酶的表達過程包括：

將包含所述基因序列的DNA片段插入載體，得到基因重組質粒；

將所述基因重組質粒轉化入宿主菌，在培養基上進行培養，用誘導劑誘導所述苯丙氨酸脫氫酶的產生；

對所述宿主菌進行超聲波破碎，然后離心分離得到粗酶混合液，所述粗酶混合液中包含所述苯丙氨酸脫氫酶以及所述甲酸脫氫酶。

4.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述粗酶混合液中，所述苯丙氨酸脫氫酶的酶比活為40～60U/ml，所述甲酸脫氫酶的酶比活為20～30U/ml。

5.根據權利要求3或4所述的合成方法，其特征在于，所述步驟B包括：

將所述雜環酮酸和所述甲酸銨加入水溶液中，調節pH值至8.2～8.5，加入所述粗酶混合液以及輔酶NAD⁺，于30～40℃下反應至原料轉化完畢，得到所述L-雜環氨基酸。

6.根據權利要求5所述的合成方法，其特征在于，

對應于每摩爾所述雜環酮酸，所述粗酶混合液的添加量為2～10ml；

對應于每摩爾所述雜環酮酸，所述輔酶NAD⁺的添加量為0.005～0.1摩爾，所述甲酸銨的添加量為1.5～5摩爾。

7.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述合成方法在所述步驟B之后還包括：

在反應后的體系中加入濃鹽酸，過硅藻土，得到濾出液；

將所述濾出液pH值調節至5.0～7.0后過強酸性陽離子交換樹脂，得到粗品；

將所述粗品濃縮，加醇類溶劑洗滌，烘干，得到純化的所述L-雜環氨基酸。

8.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述雜環酮酸的制備方法包括以下步驟：

使雜環酮與乙酐、乙酸鈉、N-乙?；拾彼岱磻玫街虚g產物，其中，所述雜環酮中的雜環選自五元單雜環、六元單雜環、七元單雜環、五元烷基取代單雜環、六元烷基取代單雜環和七元烷基取代單雜環中的任一種，所述雜環酮的酮基的結構式為且位于所述雜環酮的任一碳位上；

使所述中間產物在路易斯堿存在的條件下發生水解反應，酸化后得到所述雜環酮酸。

9.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述雜環酮酸的制備方法包括以下步驟：

將雜環烷基化合物與草酸二乙酯在正丁基鋰或叔丁醇鉀存在的條件下反應，生成雜環酮酸酯，其中，所述雜環烷基化合物中的雜環選自五元單雜環、六元單雜環、七元單雜環、五元烷基取代單雜環、六元烷基取代單雜環和七元烷基取代單雜環中的任一種，所述雜環烷基化合物的烷基為甲基且位于所述雜環烷基化合物的任一碳位上；

將所述雜環酮酸酯在路易斯堿存在的條件下發生水解反應，酸化得到所述雜環酮酸。

10.一種藥物組合物，其特征在于，包括藥物有效劑量的如權利要求1至9中任一項所述的合成方法合成得到的L-雜環氨基酸以及藥用載體。