[發明專利]一種用于檢測氧化應激標志物d-ROMs的體外檢測方法

在審

• 申請號: 201310264756.2
• 申請日: 2013-06-28
• 公開（公告）號: CN104251858A
• 公開（公告）日: 2014-12-31
• 發明（設計）人: 王辰;郭健;楊汀;王萌;肖飛;鄒麗輝;鐘琳曄
• 申請（專利權）人: 王辰
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種操作簡單、成本低廉、成功率高的檢測ROMs的方法，其特征在于，該方法包括：

1)全血離心，分離血清和血細胞；

2)取適量步驟1)中血清，加入Tris酸緩沖液配制的適宜濃度的芳香胺(DMPD，N，N-二甲基對苯二胺二鹽酸鹽)溶液；

3)血清中二價鐵及三價鐵在酸緩沖液中從血清蛋白中釋放，過氧化氫物(ROOH)與二價鐵及三價鐵反應，生成烷氧自由基(RO^*)和過氧化自由基(ROO^*)；

4)步驟3)中生成的烷氧自由基(RO^*)和過氧化自由基(ROO^*)將芳香胺氧化，生成粉紅色產物；

5)粉紅色產物用波長為505nm的自動生化分析儀讀數，顏色強度與讀取OD值(ROMs濃度)呈比例。

6)在以上步驟進行的同時，步驟1)中血清以不同濃度的H₂O₂代替，余步驟不變，以不同濃度H₂O₂反應產物讀取的OD值做標準曲線，由此計算出血清中過氧化氫物(ROOH)相當于H₂O₂的濃度。

2.如權利要求1所述檢測ROMs的方法，其特征在于，步驟2)中所述酸緩沖液為：濃度為100mM的Tris-Cl(PH值為2)。

3.如權利要求1所述檢測ROMs的方法，其特征在于，步驟2)中所述芳香胺為：100mM的Tris-Cl酸緩沖液配制的濃度為5mM的DMPD。

4.如權利要求1所述檢測ROMs的方法，其特征在于，步驟6)中所用已知濃度的H₂O₂代替血清，測定的OD值可做標準曲線，用以計算血清中過氧化氫物(ROOH)相當于H₂O₂的濃度。

5.一種如權利要求1所述通過檢測血液中總的活性氧代謝物(ROMs)含量從而評價人體內整體氧化應激水平的應用。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，針對ROMs的氧化應激分析可作為治療方案制定或預后判斷等的依據，具有相當重要的臨床意義。