[發(fā)明專利]一種可同時(shí)檢測古龍酸、古龍酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法

有效

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• 申請日: 2013-06-27
• 公開（公告）號: CN103344719A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉宇浩;徐莉;張海宏;謝占武;胡昊;趙利軍;王國君;敖志剛
• 申請（專利權(quán)）人: 東北制藥集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 沈陽維特專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 21229
• 代理人: 甄玉荃

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)分析領(lǐng)域中的同時(shí)對多組分進(jìn)行檢測，尤其是涉及一種可同時(shí)檢測古龍酸、古龍酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法。

背景技術(shù)

維生素C是藥品和食品工業(yè)中的重要原料，目前，工業(yè)上主要采用萊氏法或二步發(fā)酵法生產(chǎn)維生素C。在采用兩步發(fā)酵法生產(chǎn)維生素C的過程中，對中間體古龍酸超濾液或古龍酸甲酯固體等進(jìn)行古龍酸、古龍酸甲酯、甲醇和乙醇的定性和定量對維生素C生產(chǎn)的過程控制和維生素C的成品質(zhì)量至關(guān)重要。其中的古龍酸又叫2-酮基-L-古龍酸，古龍酸甲酯又叫做2-酮基-L-古龍酸甲酯。

傳統(tǒng)上主要采用紙層析法和碘量法檢測發(fā)酵液中的古龍酸，上述方法具有一定的局限性和繁瑣性，個(gè)別微量物質(zhì)無法檢測出來，并且檢測出的數(shù)據(jù)偏差較大。近年來，隨著高效液相色譜（HPLC）的迅速發(fā)展，開始有學(xué)者專門研究針對古龍酸的高效液相方法。肖入峰等為了快速準(zhǔn)確的檢測維生素C生產(chǎn)工藝中維生素C的重要前體物古龍酸的濃度，采用高效液相色譜法進(jìn)行測定，選用Carbohydrate分析柱，乙腈：磷酸二氫鉀=60：40的流動(dòng)相，在波長210nm處紫外光檢測，控制流速為1ml/min和溫度45℃，結(jié)果表明古龍酸在6min左右出峰，與VC具有較好分離度[文獻(xiàn)來源：2-酮基-L-古龍酸的高效液相色譜測定方法和條件[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù),2012,05:47-51.]。趙元芬等采用高效液相色譜法對古龍酸固體催化轉(zhuǎn)化工藝過程的古龍酸甲酯、維生素C鈉、古龍酸的含量進(jìn)行了測定，其采用的條件為：色譜柱為Inertsil柱，流動(dòng)相A相為乙腈，B相為0.20%TFA水溶液，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫45℃[文獻(xiàn)來源：高效液相色譜法測定古龍酸酯化轉(zhuǎn)化工藝過程中多組分含量[J].中國藥業(yè),2010,22:36-37.]。

可以看出，目前的研究無法同時(shí)對維生素C生產(chǎn)中古龍酸、古龍酸甲酯、甲醇和乙醇進(jìn)行定性和定量，因此，研制開發(fā)一種可同時(shí)檢測古龍酸、古龍酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法一直是亟待解決的課題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種可同時(shí)檢測古龍酸、古龍酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法，該方法檢測速度快、檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、靈敏度高、操作方法簡便、檢測試劑和儀器應(yīng)用廣泛。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種可同時(shí)檢測古龍酸、古龍酸甲酯、甲醇和乙醇的高效液相方法，所述方法包括如下步驟：

（1）色譜條件

色譜柱為聚苯乙烯二乙烯苯樹脂柱，流動(dòng)相為稀酸水溶液，流速為0.2-0.6ml/分鐘，柱溫25-85℃；檢測器為示差折光檢測器；

（2）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品，使用流動(dòng)相稀釋成一定濃度后，過濾，得到標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

（3）供試品溶液的制備

精密稱取適量供試品，使用流動(dòng)相稀釋成一定濃度后，過濾，得到供試品溶液；

（4）測定

將標(biāo)準(zhǔn)品溶液與供試品溶液分別進(jìn)行高效液相色譜檢測，其中供試品溶液中待檢測峰之間的分離度大于1.5，分別得到標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖與供試品溶液色譜圖，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的出峰時(shí)間來進(jìn)行供試品組分的定性，通過外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算來得到待檢測組分的含量；