[發明專利]一種阿加曲班注射液有關物質的檢測方法

無效

• 申請號: 201310263342.8
• 申請日: 2013-06-21
• 公開（公告）號: CN104237397A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 周革文;王秋成
• 申請（專利權）人: 深圳市泛谷醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/36
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種阿加曲班注射液有關物質的檢測方法，屬于醫藥技術領域。?

背景技術

阿加曲班是一種合成的單價小分子直接凝血酶抑制劑，它可選擇性地與凝血酶的催化活性位點(絲氨酸-組氨酸-精氨酸)進行可逆性地結合，從而發揮競爭性的抑制作用。與肝素和其他直接凝血酶抑制劑不同的是阿加曲班可抑制血凝塊中的凝血酶。阿加曲班的抗血栓作用不需要輔助因子抗凝血酶III。阿加曲班通過抑制凝血酶催化或誘導的反應，包括血纖維蛋白的形成，凝血因子V、VIII和XIII的活化，蛋白酶C的活化，及血小板聚集發揮其抗凝血作用。其作用特點為：①直接滅活凝血酶(因子II?a)的活性，對凝血酶的產生沒有直接作用，其作用不依賴于抗凝血酶；②不但滅活液相凝血酶，還能夠滅活與纖維蛋白血栓結合了的凝血酶；③阻斷凝血瀑布的正反饋，間接抑制凝血酶的產生；④治療劑量下對血小板功能無影響，不導致血小板減少癥；⑤具有良好的劑量-反應關系，效果和安全性可以預測；⑥與活化部分凝血活酶時間(APTT)或者活化凝血時間(ACT)相關性良好。?

在藥品生產、貯存和使用過程中，需要對產品質量進行檢驗以確保符合藥用要求，而質量檢驗中最關鍵的一項是有關物質檢測，如不能有效檢出樣品中含有的雜質則可能會造成毒副反應。?

發明內容

本發明提供一種阿加曲班注射液有關物質的檢測方法，采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以緩沖液(取冰醋酸1ml，稀釋至400ml，用氨試液或氨水調pH值至6.0)-甲醇混合液為流動相；柱溫為45℃；檢測波長為259nm；直接精密移取阿加曲班注射液100μl進樣測定。?

與標準JX20090312、標準YBH11152005及阿加曲班原料藥日本藥典JP15增補版中有關物質的檢測方法相比，本發明提供的有關物質的檢測方法不但能將主成分與相鄰最難分離的雜質A有效分離檢測，且阿加曲班的主要氧化降解產物(雜質B)也基本上與相鄰最近峰均能達分離檢測要求，同時各種破壞試驗的降解產物、空白輔料、空白溶劑(包括酸堿降解空白溶劑)對有關物質的檢測無干擾，而標準YBH11152005的破壞樣中的主成分、雜質B峰均與相鄰峰未分離；JP15增補版除光降解外，主成分峰與相鄰最近峰均分離度均可達1.5以上，但雜質B除高溫分離度可達要求外，其他均不能分離檢測；標準JX20090312主成分第一峰與雜質A第二峰包合，不能分離檢測，且堿降解雜質B與相鄰前峰的分離較差；綜上所述，本發明提供的方法專屬性好，可將主成分與雜質有效分離檢測，可有效地控制阿加曲班注射液的質量。?

本發明提供的有關物質檢測方法操作步驟如下：?

照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄V?D)測定。?

色譜條件與系統適用性用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以緩沖液(取冰醋酸1ml，稀釋至400ml，用氨試液或氨水調pH值至6.0)-甲醇(52∶48)為流動相；柱溫為45℃；檢測波長為259nm；調整流速使阿加曲班兩個色譜峰中第一個色譜峰的保留時間約為50分鐘。精密稱取雜質A和阿加曲班對照品各5mg，?置25ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，作為系統適用性測試液，精密量取100μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質A的第二個色譜峰與阿加曲班第一個色譜峰的分離度應不小于1.2。?

測定法取本品作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。精密量取對照溶液100μl，調節檢測器靈敏度，使阿加曲班第一個色譜峰的峰高約為滿量程的10％。分別精密量取本品和對照溶液各100μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至阿加曲班第一個色譜峰保留時間的1.4倍。供試品溶液的色譜圖中如顯示雜質峰，單個雜質的峰面積不得大于對照溶液主峰面積(0.2％)，其中相對保留時間為0.19處的色譜峰(以阿加曲班第一個色譜峰為參比)為降解產物，計算時其峰面積應乘以校正因子2.44，扣除溶劑和雜質B峰后其他雜質峰面積和不得大于對照溶液主峰面積的1.5倍(0.3％)。?

有關物質檢查方法驗證研究?

1、進樣精密度?

取本品作為供試品溶液，精密量取100μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復測定6次，計算阿加曲班的保留時間(以主成分第一峰計)與主成分兩峰面積和的相對標準偏差，結果見表1。?

表1有關物質進樣精密度試驗結果?

2、重復性?