[發明專利]一種高效克隆及表達的微藻葉綠體載體及其應用

無效

• 申請號: 201310263325.4
• 申請日: 2013-06-27
• 公開（公告）號: CN103352048A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發明（設計）人: 李宏業;謝偉紅;朱聰聰;楊維東;劉潔生
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種高效克隆及表達的微藻葉綠體載體，其特征在于，包括同源重組序列trnI、同源重組序列trnA、啟動子PrbcL、終止子TrbcS、上游XcmI序列和下游XcmI序列，上游XcmI序列和下游XcmI序列引入啟動子PrbcL和終止子TrbcS之間，形成了目的基因克隆位點，同源重組序列trnI在啟動子PrbcL的上游，同源重組序列trnA在終止子TrbcS的下游；所述的同源重組序列trnI的序列如SEQ?ID?NO.1所示，同源重組序列trnA的序列如SEQ?ID?NO.2所示，啟動子PrbcL的序列如SEQ?ID?NO.3所示，終止子TrbcS的序列如SEQ?ID?NO.4所示，上游XcmI序列和下游XcmI序列均如SEQ?ID?NO.5所示。

2.根據權利要求1所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體，其特征在于，在下游XcmI序列后增加Myc標簽多肽序列，所述的Myc標簽多肽序列如SEQ?ID?NO.6所示。

3.根據權利要求1或2所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體，其特征在于，所述的引入是通過不依賴于連接反應的高效克隆方法來引入的。

4.根據權利要求1或2所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體，其特征在于，還包括抗性篩選表達盒及目的基因。

5.根據權利要求4所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體，其特征在于，所述的抗性篩選表達盒由啟動子、終止子及抗性篩選標記基因組成。

6.根據權利要求5所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體，其特征在于，所述的抗性篩選標記基因為氯霉素抗性基因。

7.根據權利要求4所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體，其特征在于，所述目的基因為綠色熒光蛋白基因eGFP基因，以TA克隆的方法插入上述的啟動子PrbcL和終止子TrbcS之間。

8.根據權利要求1或2所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體，其特征在于，所述的微藻，優選為三角褐指藻。

9.權利要求1或2所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體在利用微藻表達外源基因上的應用。

10.權利要求4所述的高效克隆及表達的微藻葉綠體載體在利用微藻表達外源基因上的應用。