[發(fā)明專利]一種與豬飼料轉(zhuǎn)化效率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及檢測方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310260434.0
• 申請日: 2013-06-27
• 公開（公告）號: CN104250646A
• 公開（公告）日: 2014-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李長春;成宏;趙書紅;李新云;朱猛進(jìn);經(jīng)璐
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種與豬飼料轉(zhuǎn)化效率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，含有SNP位點(diǎn)，其特征在于，所述的SNP位點(diǎn)位于SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列中，?SEQ?ID?NO：1的第516?bp處有一個(gè)G516-A516的堿基突變。

2.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記，其特征在于，分子標(biāo)記的引物序列為：正向引物:?5'?TCATCTCATTTCCCCCTCCCAGC?3'；反向引物:?5'GAAAACTTCACCCAGGCAAACAGAGGCCCTATTTAGC?3'。

3.一種基于權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記的檢測方法，其特征在于，其步驟是：

（1）引物序列

Orexin的SNP分型引物:??正向引物:?5'?TCATCTCATTTCCCCCTCCCAGC?3'

??反向引物:?5'?GAAAACTTCACCCAGGCAAACAGAGGCCCTATTTAGC?3'

（2）PCR擴(kuò)增條件

PCR反應(yīng)總體積10μl，其中豬基因組DNA模板1μl，正反向引物各0.2nmol/μl，PCRmix?5μl，最后加入去離子水至總體積10μl；PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5min后，循環(huán)30次95℃變性30s、58℃退火30s、72℃延伸40s；最后72℃延伸5min；PCR產(chǎn)物經(jīng)2％W/V瓊脂糖凝膠電泳檢測；

（3）RFLP檢測

PCR產(chǎn)物酶切反應(yīng)體積是10μl?，其中PCR產(chǎn)物5μl，去離子水3.5μl，10×buffer?1μl，限制性內(nèi)切酶AluⅠ為0.5μl?(10U/μl)?，將樣品混勻后離心，37℃培養(yǎng)箱放置12h，用3.5%W/V瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結(jié)果，記錄基因型，在紫外燈下拍照；

酶切產(chǎn)生三種基因型，GG基因型只有215bp一條帶，AA基因型有179bp和36bp兩條帶，雜合子GA基因型有215bp、179bp和36bp三條帶，其中36bp目的帶不出現(xiàn)。

4.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記在豬飼料轉(zhuǎn)化效率性狀相關(guān)分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求2所述的分子標(biāo)記的引物序列在豬飼料轉(zhuǎn)化效率性狀相關(guān)分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。