[發明專利]一種寶蓮燈子房培養及組培快繁方法

有效

• 申請號: 201310260351.1
• 申請日: 2013-06-26
• 公開（公告）號: CN103385167A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 王燕;陳劍平;汪一婷;呂永平;牟豪杰;陳志
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

技術領域

本發明涉及培養及組培領域，具體涉及一種寶蓮燈子房培養及組培快繁方法。

背景技術

寶蓮燈(Medinilla?magnifica)為野牡丹科酸腳桿屬常綠小灌木，又名美丁花、粉苞酸腳桿，原產于東南亞的熱帶雨林，觀賞價值極高。它的葉面寬大典雅，宮燈花型新奇美麗且花期超長，果實圓潤玲瓏，是一種觀花、葉、果俱佳的精品花卉，也是近年來最具發展潛質的時尚新葩之一。但由于寶蓮燈為進口花卉品種，資源較為稀缺，使得其價格在國內市場上一直居高不下，普通消費者難以承受。目前寶蓮燈的繁殖以扦插方式為主、播種繁殖為輔。扦插的后期管理技術要求偏高、而扦插成活率和繁殖系數較低；此外，在自然條件下較難獲得成熟的寶蓮燈種子，其播種繁殖成苗率很低。綜上所述，現有的寶蓮燈繁育方法均不能實現大規模的工廠化生產，難以滿足快速增長的市場需求。因此，開展寶蓮燈的人工繁殖工作具有現實必要性。

早在二十世紀七八十年代國外研究者就開始考慮通過組織培養方式對木本植物寶蓮燈進行種苗快繁，并嘗試以寶蓮燈的表皮組織、根尖及莖尖等做為外植體來建立其培養體系(參見In?frontiers?of?plant?tissue?culture.Than?Than?Van?K,Trinh?H,(Thorpe,T.A.,ed.),Calgary,Alta,Canada,第37頁，1978年)，但是均未能得到無菌的寶蓮燈活體莖尖。Vande?Casteele等（參見The?phenolics?and?a?hydrolysable?tannin?polyphenol?oxidase?of?Medinilla?magnifica.Vande?Casteele?et?al.,Phytochemistry,第20卷第5期,1105-1112頁,1981年）研究發現寶蓮燈組織內含有大量的酚類化合物和水解鞣酸多酚氧化酶，在組培過程中容易誘發嚴重的褐化，對培養物生長極為不利，從而導致寶蓮燈組織培養的失敗。在此之前還沒有寶蓮燈組織培養成功的報道，更沒有成功的實例。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種寶蓮燈子房培養及組培快繁方法，一種通過子房培養獲得無菌材料并對寶蓮燈進行快繁的方法。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的。這種寶蓮燈子房培養及組培快繁方法，該方法包括以下幾個步驟：

1）、培養基的配制：

（1）基本培養基：1/2MS培養基，蔗糖20～30g/L，瓊脂5～9g/L，pH=4.8～5.8；

（2）發育培養基：1/2MS+200～800mg/L水解酪蛋白+0.3～2.0%活性炭；

（3）增殖培養基：1/2MS+2.5～1.0mMβ-巰基乙醇+0.5～2.0mg/L6-BA+0.1～1.0%活性炭；

（4）生根培養基：1/2MS+2.5～1.0mMβ-巰基乙醇+0.05～0.2mg/L?NAA+0.1～1.0%活性炭；

2）、子房外植體的選取及消毒：選取寶蓮燈子房進行消毒處理；

3）、接種及子房培養：將步驟2）消毒后的寶蓮燈子房在無菌條件下剖開后接種于發育培養基上進行寶蓮燈子房培養；

4）、種子的成熟及萌發：待步驟3）的寶蓮燈子房培養成熟并萌發后小心轉至基本培養基上生長成幼苗；

5）、增殖培養：將步驟4）的幼苗切掉根部后轉接于增殖培養基上增殖；

6）、生根培養：將步驟5）獲得的增殖苗轉接于生根培養基上誘導生根；

7）、煉苗及移栽：將步驟6）的生根苗根部的培養基洗掉后移栽至裝有基質的營養缽中，煉苗6～12天后將幼苗移至溫室培養。

進一步地，在所述步驟2）中，所述的寶蓮燈子房外植體直徑為0.3cm。

進一步地，在所述步驟2）中，所述的消毒處理是將寶蓮燈子房遠軸端的突起部分用解剖刀削平后，先用濃洗衣粉溶液浸泡后再用自來水沖洗干凈，然后依次在體積比為70%的酒精、有效氯濃度為1%的次氯酸鈉溶液和質量分數為0.1%的升汞中分別浸泡0.5～1min、5～10min和4～8min，最后用無菌水沖洗3～5次。

進一步地，在所述步驟3）中，所述的寶蓮燈子房培養是對剖開后的子房接種于發育培養基上行培養，并使部分子房內組織與培養基接觸。

進一步地，本發明在所述步驟4）中，所述的萌發幼苗須小心無損地轉接到基本培養基上。