[發明專利]水黃皮素或水黃皮提取物在抗流感病毒藥物中的應用

有效

• 申請號: 201310259698.4
• 申請日: 2013-06-26
• 公開（公告）號: CN104248654B
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: 嚴啟新;譚道鵬;曾偉珍;陳艷萍;王宇;馮漢林
• 申請（專利權）人: 深圳海王藥業有限公司
• 主分類號: A61K36/48
• 分類號: A61K36/48;A61K31/352;A61P31/16;A61K135/00;A61K127/00
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司11006
• 代理人: 黃韌敏

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及水黃皮總黃酮提取物或水黃皮素的應用。

背景技術

流感病毒屬正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，具有包膜的8個片段，共編碼11種蛋白質的單鏈負RNA病毒。流感病毒是引起流行性感冒的病原，分為甲、乙、丙三型，其中以甲型流感對人類威脅最大。人流感病毒主要是H1、H2和H3亞型，其中以H1N1亞型病死率最高，因此本發明主要以H1N1型流感病毒為研究對象對水黃皮總黃酮提取物和水黃皮素的抗病毒活性進行研究。

目前，流感仍屬未能有效控制的急性上呼吸道傳染病，具有傳染性高、傳播迅速、已發生流行等特點。由于流感病毒的抗原變異能力強，而疫苗只對已知的流感病毒亞型有預防作用，而對于由抗原性漂移或抗原性轉換所產生的新型流感病毒無效，因此，每隔幾年流感病毒就有一次較大范圍的流行。據統計，全世界平均每年有50-100萬人死于流感。由此可見，流感作為一種病毒性傳染病不僅嚴重威脅著公眾健康，而且給國家和社會帶來了沉重的經濟負擔。雖然已知的流感病毒已經得到控制，但是，由于流感病毒的抗原變異能力極強且相當頻繁，疫苗的研制和生產相對滯后，對于易感人群的保護率不高，因此，新的流感大流行隨時都有可能爆發。在這種情形下，尋找具有預防和治療作用的抗流感病毒藥物就顯得尤為重要和緊迫。

水黃皮Pongamia pinnata(L.)Merr.為豆科(Leguminosae)水黃皮屬的半紅樹植物，別名水流豆。水黃皮屬全世界僅有1種，廣泛分布于印度、馬來西亞及我國南部沿海。在我國民間用其種子榨出的油治療疥癩、膿瘡及風濕。在印度，其種子和種子油用來治療白斑病、麻風病、風濕病，葉子用于治療痔瘡、腫瘤、傷口消炎等。現代藥理研究表明，水黃皮總黃酮提取物具有抑菌、抗炎、鎮痛、抗皰疹病毒、抗潰瘍等活性，但尚未見有抗流感病毒的報道(黃欣碧,龍盛京.半紅樹植物水黃皮的化學成分和藥理作用研究進展[J].中草藥,2004,35(9):1073-1076.)。本發明經試驗證明，水黃皮總黃酮提取物及水黃皮素對甲型流感病毒感染的MDCK細胞具有很好的抗流感病毒作用；另外，在小鼠流感動物模型中同樣表現出了很好的抗流感病毒活性。這提示水黃皮總黃酮提取物及水黃皮素在治療甲型流感病毒感染性疾病領域具有很好的開發利用前景。

發明內容

本發明的一個目的是提供水黃皮總黃酮提取物或水黃皮素在治療和/或預防流感病毒藥物中的應用，為臨床上流感病毒性疾病的治療提供一種安全有效的天然藥物。

本發明的技術方案為：

水黃皮總黃酮提取物或水黃皮素在制備用于治療和/或抗流感病毒藥物中的應用。

進一步地，所述水黃皮總黃酮提取物是從水黃皮莖枝和/或葉提取而得，總黃酮的含量為50％～70％重量；

其中，含有水黃皮素；

所述總黃酮的含量以水黃皮素為對照品，采用紫外分光光度法測定；

水黃皮素的含量為5％～10％重量。

本發明所述的水黃皮總黃酮提取物通過下述方法制備：

(1)取水黃皮莖枝和/或葉，以50%～90%乙醇回流提取1～3次，每次提取1～3小時，合并提取液；

(2)將步驟1所得提取液減壓濃縮至無醇味，離心，取上清液；

(3)將步驟2所得的上清液通過聚酰胺層析柱分離，用水洗脫2～5個柱體積，再用20～70%乙醇洗脫2～10個柱體積，收集乙醇洗脫液；

(4)濃縮、干燥乙醇洗脫液得到水黃皮總黃酮提取物。

進一步地，所述水黃皮總黃酮提取物的制備方法，包括以下步驟：

(1)取水黃皮莖枝和/或葉，以80%乙醇回流提取2次，每次提取2小時，合并提取液；

(2)將步驟1所得提取液減壓濃縮至無醇味，離心，取上清液；

(3)將步驟2所得的上清液通過聚酰胺層析柱分離，用水洗脫3個柱體積，再用50%乙醇洗脫5個柱體積，收集乙醇洗脫液；

(4)濃縮、干燥乙醇洗脫液得到水黃皮總黃酮提取物。

本發明所述水黃皮素具有如圖4所示的HPLC色譜圖，其中，色譜圖的特征峰為：水黃皮素保留時間：10.8min；

色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：甲醇-0.2%HAc(43:57)；流速：1ml/min；檢測波長：260nm。

本發明所述水黃皮素是從水黃皮總黃酮提取物中提純而得，包括以下步驟：

(1)通過反相硅膠層析柱分離，以30%～60%乙醇洗脫，得到水黃皮素粗品；