[發(fā)明專利]一種煙草及煙草制品中尼古丁生物堿的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310257579.5
• 申請(qǐng)日: 2013-06-15
• 公開（公告）號(hào): CN103323419A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫金影;吳鐵;呂思敏;鐘月春;鄭志明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N21/33
• 分類號(hào): G01N21/33;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種煙草及煙草制品中尼古丁生物堿的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

煙草生物堿是煙草及煙草制品的重要組成部分，其中尼古丁生物堿也稱煙堿，占煙草生物堿總量的98％，占整個(gè)煙草干重的1％-3％。一方面，尼古丁生物堿是導(dǎo)致吸煙成癮的重要誘因，且本身有劇毒；另一方面尼古丁及其他含量較低的生物堿的存在和含量高低影響香煙的口感和品質(zhì)，而現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)中沒有專屬檢測(cè)尼古丁的方法，且共存生物堿的存在常常干擾尼古丁生物堿的檢測(cè)結(jié)果，因此需要建立煙草及煙草制品中尼古丁的靈敏、快速且專屬性強(qiáng)的檢測(cè)方法。

尼古丁生物堿在260nm的紫外區(qū)有響應(yīng)，同時(shí)有電化學(xué)和電化學(xué)發(fā)光響應(yīng)，因此目前人們已經(jīng)建立了紫外分光光度法、電化學(xué)法和電化學(xué)發(fā)光法來檢測(cè)煙草中的尼古丁生物堿。但由于紫外分光光度法、電化學(xué)法和電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法是通用的檢測(cè)方法，因此檢測(cè)中受干擾較多。與氣相色譜、液相色譜、毛細(xì)管電泳等復(fù)雜體系的分離技術(shù)相結(jié)合能夠有效克服上述檢測(cè)中遇到的問題。因質(zhì)譜分辨率高，定性能力強(qiáng)，對(duì)分離的條件要求相對(duì)較低，因此常與氣相色譜、液相色譜和毛細(xì)管電泳等聯(lián)用用于煙草和煙草制品中尼古丁及其他生物堿的定性和定量分析。但質(zhì)譜儀價(jià)格昂貴，維持費(fèi)用和使用費(fèi)用高，且對(duì)操作技術(shù)的要求高，限制了它在日常分析中的應(yīng)用，因此開發(fā)成本低廉且操作簡(jiǎn)便的用于煙草及煙草制品中尼古丁生物堿的分析方法至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有煙草尼古丁生物堿檢測(cè)技術(shù)中常用分離手段與MS檢測(cè)聯(lián)用時(shí)儀器價(jià)格昂貴、維持費(fèi)用高和操作技能要求高的問題，開發(fā)維持費(fèi)用低、操作簡(jiǎn)單同時(shí)準(zhǔn)確性高、分析速度快的分析方法。

本發(fā)明煙草及煙草制品中尼古丁生物堿的檢測(cè)方法包括如下步驟：

1，取煙絲樣品，加入水作為萃取溶劑，超聲萃取，微孔濾膜過濾，收集濾液，流動(dòng)相稀釋后作為進(jìn)樣溶液；

2，利用高效液相色譜-紫外檢測(cè)聯(lián)用分析上述樣品溶液，對(duì)煙絲中尼古丁生物堿進(jìn)行定性和定量。

步驟1中，煙絲與萃取劑水的比例為200mg∶20mL。

步驟1中，超聲萃取時(shí)間為30min，萃取之間靜置時(shí)間10min，超聲萃取之后靜置時(shí)間10min。

步驟1中，收集濾液，流動(dòng)相稀釋倍數(shù)為10。

步驟2中，所述分離和檢測(cè)條件為：檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，色譜柱為ZORBAX?Eclipse?Plus?C18柱(4.6mm×250mm×5μm，Agilent)，流動(dòng)相為甲醇∶20mmol/L?KH₂PO₄∶三乙胺＝10∶90∶0.05％(v：v，以H₃PO₄調(diào)節(jié)pH至3.2)，流速1.0mL/min。以尼古丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液中尼古丁生物堿的保留時(shí)間對(duì)煙草和煙草制品中的尼古丁生物堿定性，外標(biāo)法定量。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有如下有益效果：

(1)本發(fā)明中所用萃取溶劑僅為水，操作步驟簡(jiǎn)便，對(duì)環(huán)境無害，對(duì)操作者身體健康無任何影響，且所得萃取液可直接用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

(2)以水為萃取劑，回收率高，能夠完全萃取煙絲中的尼古丁生物堿和其他水溶性的生物堿，方法準(zhǔn)確度高。

(3)本發(fā)明所采用的分離檢測(cè)方法為HPLC-UV，儀器價(jià)格低廉，維護(hù)和運(yùn)行成本低，利于方法的推廣。

(4)本發(fā)明中檢測(cè)方法中所采用的流動(dòng)相有機(jī)相所占比例小，對(duì)環(huán)境污染少，利于保護(hù)操作者的身體健康。

附圖說明

圖1為實(shí)施例中尼古丁生物堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC譜圖；

圖2為實(shí)施例中煙草樣品萃取液的HPLC譜圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。實(shí)施例僅用于本發(fā)明而不限于本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例中的煙絲樣品一種來自安徽中煙集團(tuán)的黃山牌香煙，兩種來自湖南中煙集團(tuán)的萬寶路和白沙香煙，一種來自廣東省湛江市廉江煙絲廠煙絲；

尼古丁標(biāo)準(zhǔn)品購自美國Sigma-Aldrich；

高效液相色譜儀為島津LC-20AT；檢測(cè)器為SPD-20A型紫外檢測(cè)器；色譜柱為ZORBAX?Eclipse?Plus?C18柱(4.6mm×250mm×5μm，Agilent)；超聲波清洗儀購自昆山超聲儀器有限公司。

實(shí)施例

1，樣品制備

配制濃度為1.0mg/mL的尼古丁甲醇儲(chǔ)備液，并于低溫暗處冷藏保存；低濃度系列由儲(chǔ)備液經(jīng)流動(dòng)相逐級(jí)稀釋而得，并同樣于冰箱暗處冷藏保存。