[發明專利]極地Pseudoalteromonas elyakovii胞外多糖及在水產養殖中的應用

有效

• 申請號: 201310257211.9
• 申請日: 2013-06-26
• 公開（公告）號: CN103320482A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 林學政;趙惠婭;鄭風榮
• 申請（專利權）人: 國家海洋局第一海洋研究所
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C08B37/00;A61K31/715;A61P31/04;A61P37/04;C12R1/01
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技術領域

本發明涉及一種能提高水產動物非特異性免疫能力的胞外多糖、其制備方法及其應用。

背景技術

海洋水產養殖是發展最為迅速的行業之一，但疾病的頻發嚴重制約了水產養殖產量的快速增長和水產貿易的健康發展，而且傳統的病害防治措施，即濫用和過量使用抗生素和其他化學藥物已經引發了一系列的環境和社會問題。隨著病原微生物抗藥性的增加，迫使人們不斷加大抗生素等的使用頻率和使用量。如何保持水產養殖的健康發展和減少化學藥物的投放量，減少對環境的污染和生產魚藥低殘留的綠色水產品是水產養殖的瓶頸問題和國民經濟發展的迫切要求。

極地微生物可產生大量的胞外多糖，在其生境適應性中發揮著重要的作用。研究發現，由極地海冰中分離得到的極地微生物產生的EPS其分子量比一般海洋微生物高5～50倍。研究者認為，高濃度的胞外多糖可以降低細胞周圍環境的水的冰點，且目前已發現多種具有避免反復凍融功效的極地微生物胞外多糖。除此之外，還發現眾多具有特殊生物活性的極地微生物胞外多糖，這說明極地微生物EPS可能具有潛在的可供開發利用的生物活性。然而，如何從極地微生物中提取胞外多糖以及其應用技術研究是本領域的技術人員亟待解決的技術問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種極地細菌Pseudoalteromonas?elyakovii胞外多糖及在水產養殖中的應用，為了實現本發明的目的，擬采用如下技術方案：

本發明一方面涉及一種極地細菌Pseudoalteromonas?elyakovii胞外多糖，其特征在于所述的極地Pseudoalteromonas?elyakovii胞外多糖通過如下制備方法獲得：以極地菌株Pseudoalteromonaselyakovii在10℃、150r/min條件下振蕩培養5-6d后，經醇沉、除蛋白、冷凍干燥后獲得。

在本發明的一個優選實施方式中，在發酵培養基(g/L)蔗糖30-40g，酵母浸膏10-20g，K₂HPO₄0.2-0.3g，陳海水，按5～7％的比例接入南極菌株Pseudoalteromonas?elyakovii種子液，于10±1℃培養120小時，胞外多糖產量可達4.8g/L。

在本發明的另一個優選實施方式中，所述的菌株為Pseudoalteromonas?elyakovii3-3-1-2，保藏編號為：CGMCC?No.7629。

本發明另一方面涉及上述多糖在水產養殖中的應用，優選的，所述的應用包括提高水產動物的非特異性免疫指標和/或降低水產動物的感染率。

在本發明的另一方面，還涉及上述多糖在提高大菱鲆抗鰻弧菌的能力，降低大菱鲆的感染率和死亡率中的應用。

在本發明的另一方面，還涉及上述多糖在提高高海參體腔液內的ACP、LSZ、CAT、T-SOD和/或MDA非特異性免疫指標中的應用。

在本發明的另一方面，還涉及上述多糖降低海參的自然感染率中的應用。

在本發明的一個優選實施方式中，所述的應用是通過注射上述多糖來實現。

具體實施方式

實施例1

制備多糖：以南極菌株Pseudoalteromonas?elyakovii3-3-1-2，保藏編號為：CGMCC?No.7629，保藏日期為：2013年5月17日，保藏單位為：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。在發酵培養基(g/L)蔗糖30-40g，酵母浸膏10-20g，K₂HPO₄0.2-0.3g，陳海水，按5～7％的比例接入南極菌株Pseudoalteromonas?elyakovii種子液，于10±1℃培養120h，經醇沉、除蛋白、冷凍干燥后獲得的極地微生物EPS，胞外多糖產量可達4.8g/L。。

實施例2

1、用0.1mol/L、pH7.4的無菌PBS緩沖液配制濃度為3mg/mL極地微生物EPS溶液。選擇體重(100±5)g、體長(12±0.6)cm、體色基本一致的健康大菱鲆，隨機分養于水族箱中，適應馴化1周后開始實驗。實驗中采用水溫15-18℃海水，每天早晨8:00喂食、10:00換水排污。實驗時，將魚隨機分為3組，每組15尾，每組處理2個重復。對照組肌肉注射0.1mL?PBS緩沖液、空白實驗組肌肉注射0.1mL多糖溶液、陽性對照組肌肉注射0.1mL黃芪多糖溶液。