[發明專利]一種重組噬菌體雙表達載體及應用

有效

• 申請號: 201310255769.3
• 申請日: 2013-06-25
• 公開（公告）號: CN103305542A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 徐海;王義偉;鮑熹;侯繼波
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N7/01;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 張立榮

1.一種重組噬菌體雙表達載體，其特征在于：是在T7噬菌體基因組中p10B基因的下游插入目的基因1，在T7噬菌體基因組中非編碼區插入含有目的基因2的真核表達盒后得到的重組雙表達載體。

2.根據權利要求1所述重組噬菌體雙表達載體，其特征在于：所述重組噬菌體雙表達載體的表面展示有目的基因1編碼的多肽，同時又能在免疫細胞內真核表達目的基因2編碼的多肽。

3.根據權利要求1或2所述重組噬菌體雙表達載體，其特征在于：所述真核表達盒含有CMV真核啟動子和SV40?PolyA尾巴。

4.根據權利要求3所述重組噬菌體雙表達載體，其特征在于：所述T7噬菌體基因組中非編碼區為T7噬菌體基因組左側578-2746位的區域。

5.根據權利要求4所述重組噬菌體雙表達載體，其特征在于：所述目的基因1為（1）或（2）或（3）的核苷酸序列：

（1）編碼口蹄疫病毒VP1結構蛋白（129-169）位多肽的核苷酸序列；

（2）編碼在口蹄疫病毒VP1結構蛋白（129-169）位多肽氨基端添加了柔性Linker氨基酸后所得多肽的核苷酸序列；

（3）編碼口蹄疫病毒VP1結構蛋白（129-169）位多肽的核苷酸序列經改變、缺失或增加一個或幾個核苷酸但仍具有口蹄疫病毒VP1（129-169）位多肽的主要抗原活性的核苷酸序列。

6.根據權利要求5所述重組噬菌體雙表達載體，其特征在于：所述目的基因2為（4）或（5）的核苷酸序列：

（4）編碼口蹄疫病毒VP1結構蛋白的核苷酸序列，如SEQ?ID?NO：2所示；

（5）編碼口蹄疫病毒VP1結構蛋白的核苷酸序列經改變、缺失或增加一個或幾個核苷酸但仍具有口蹄疫病毒VP1結構蛋白的主要抗原活性的核苷酸序列。

7.根據權利要求6所述重組噬菌體雙表達載體，其特征在于：在T7噬菌體非編碼區插入含有目的基因2的真核表達盒的具體方法為：

在T7噬菌體的非編碼區選擇插入位點，分別PCR擴增該插入位點上、下游基因序列作為左、右同源臂，構建自上游到下游依次含有左同源臂和右同源臂的重組克隆載體；

將目的基因2插入CMV真核啟動子和SV40?PolyA尾巴之間，得到真核表達盒；

將所述真核表達盒插入所述重組克隆載體的左、右同源臂之間，得到同源重組質粒；

所述同源重組質粒與T7噬菌體基因組進行同源重組，得到非編碼區插入了含有目的基因2的真核表達盒的重組T7噬菌體。

8.一種以權利要求1－7之一所述重組噬菌體雙表達載體為抗原的疫苗。