[發(fā)明專利]一種處理橡膠廢氣菌種的篩選分離方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310255261.3
• 申請日: 2013-06-25
• 公開（公告）號: CN103333827A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭江家;李勇;宮磊;王龍;辛龍勝
• 申請（專利權(quán)）人: 軟控股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/085;C12R1/11;C12R1/01;C12R1/38
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技術(shù)領(lǐng)域

?本發(fā)明涉及微生物菌株篩選技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種處理橡膠廢氣菌種的篩選分離方法。

背景技術(shù)

橡膠惡臭廢氣排放主要來自于橡膠制品過程中的硫化、煉膠等工序，廢氣排放量約占橡膠制品生產(chǎn)排放總量的60%以上。這類廢氣具有氣量大、溫度高、成分復雜、濃度低等特點，且呈惡臭味，給周邊環(huán)境及車間內(nèi)操作工人的身體健康造成危害。

橡膠廢氣的主要成分是甲苯、二甲苯等，這些惡臭污染物在橡膠制品生產(chǎn)過程中的排放系數(shù)都很大，因此必須對其進行嚴格控制。我國目前對橡膠廢氣采取的凈化措施主要有吸收法、吸附法、燃燒法和冷凝法等。雖然這些方法有不少的優(yōu)點，但也存在著很大的不足:吸收法和吸附法一般都需要對吸收劑和吸附劑進行再生，而這既增加了工藝的復雜性和設(shè)備的投資額，還使運行操作變得復雜。燃燒法還可能由于廢氣燃燒不完全而會產(chǎn)生有害的燃燒產(chǎn)物，若燃燒溫度過高，可能會產(chǎn)生一氧化氮污染并且能耗大；對于催化燃燒法還有需要防止催化劑的中毒和老化問題，另外，燃燒設(shè)備運轉(zhuǎn)時還存在一定的安全隱患。冷凝法要獲得高回收率需要較高的壓力和較低的溫度，設(shè)備費用和操作費用較高，適用于高沸點和高濃度廢氣回收，一般與其它方法（吸附、吸收法）聯(lián)合使用。這些方法對于低濃度的有機廢氣凈化來說，凈化效果不佳，而且會產(chǎn)生二次污染。

與常規(guī)的有機廢氣處理技術(shù)相比，生物法處理技術(shù)主要優(yōu)點有:（1）去除效果好（2）工藝設(shè)備簡單（3）投資及運行費用低，生物過濾的優(yōu)勢在于初期投資、操作和維護費用低。（4）安全性能好，無二次污染生物法處理反應條件溫和，常溫、常壓和中性條件。（5）能耗少，生物過濾器能耗約1.8-2.5kw·h/1000m³，與其它氣態(tài)有機物染物控制技術(shù)相比能耗低很多。綜上所述，生物法處理有機廢氣技術(shù)具有非常突出的有點，尤其在處理大氣量、低濃度(<3000mg/m³)甲苯類廢氣時更顯示出其優(yōu)越性。

生物法處理橡膠廢氣采用的菌種為好氧性菌種，且營養(yǎng)物質(zhì)是甲苯和二甲苯，這種方法的主要問題是，如何獲得降解甲苯和二甲苯的優(yōu)勢菌種，從而提高處理效率。

從混雜群體中分離特定微生物常用的方法有：控制分離培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分、控制培養(yǎng)基的pH、添加抑制劑、控制培養(yǎng)溫度、控制空氣條件、對樣品進行特殊處理等。常用的純種分離方法有平板劃線分離法、簡單平板分離法、稀釋分離、涂布分離法、毛細管分離法、顯微操作單細胞分離法等。本發(fā)明采用控制分離培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分和平板劃線分離法對微生物進行篩選分離。在篩選過程中，由于甲苯、二甲苯易于揮發(fā)，采用固體培養(yǎng)時會減少菌落對甲苯和二甲苯的吸收，故在篩選菌落時我們采用液體、固體、液體交替選擇培養(yǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中廢氣處理技術(shù)投資費用高，對低濃度廢氣處理效果差的不足，本發(fā)明提供一種橡膠廢氣菌種的篩選分離方法，該方法可有效地篩選分離出以橡膠廢氣為碳源的微生物菌種。

所述的處理橡膠廢氣菌種的篩選分離方法，包括以下步驟：

（1）樣品采集：用無菌取樣瓶采集橡膠生產(chǎn)廠的底泥，放入恒溫箱中待用，溫度為25℃~35℃。

（2）增菌培養(yǎng)：在好氧條件下，向底泥中加入10g/L的葡萄糖進行恒穩(wěn)培養(yǎng)，溫度為25℃~35℃，培養(yǎng)時間為2~3天。

（3）馴化培養(yǎng)：取底泥分裝到裝有液體富集培養(yǎng)基的錐形瓶中，然后分別加入甲苯、二甲苯，甲苯、二甲苯的加入量為10mL/L~12?mL/L，在25℃~35℃溫度下?lián)u床恒溫培養(yǎng)馴化，培養(yǎng)是將為3~5天。

在馴化的培養(yǎng)液中用接種環(huán)提取培養(yǎng)液，接種到固體富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)2~3天后，將固體富集培養(yǎng)基上長出的細菌采用影印法將其接種到以甲苯、二甲苯、甲苯和二甲苯的混合為唯一碳源的固體選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)3~5天后觀察其菌落，挑取不同形態(tài)的單菌落在液體選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，再次進行馴化，按上述馴化方法，連續(xù)馴化2~3次后接種到固體富集培養(yǎng)基上。

（4）菌種純化：在馴化好的固體富集培養(yǎng)基上挑取不同形態(tài)的單菌落在固體富集培養(yǎng)基上劃線純化，培養(yǎng)溫度為25℃~35℃，培養(yǎng)時間2~3天，然后將純化菌落接至分別以甲苯、二甲苯、甲苯和二甲苯混合為唯一碳源的固體選擇培養(yǎng)基內(nèi)進行恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25℃~35℃，培養(yǎng)時間3~5天，不斷地進行選擇、富集培養(yǎng)，最終將純化的菌落移接到斜面培養(yǎng)基中，從所分離的可以處理橡膠廢氣的菌種中，把其中的每一個菌種都采用相同的方法，平行接種于含有廢氣的固體培養(yǎng)基中，如果平行接種的菌落都能在廢氣中存活并處理廢氣，則為可選用的菌種之一，否則淘汰。