[發明專利]一種利用促進劑SRpf富集高效聯苯降解菌群的方法

有效

• 申請號: 201310254289.5
• 申請日: 2013-06-24
• 公開（公告）號: CN103436460A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 蘇曉梅;沈超峰;胡金星;秦智慧;黃榮浪
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A62D3/02;C12R1/265
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

技術領域

本發明屬于污染物微生物降解領域，尤其涉及一種利用促進劑SRpf富集高效聯苯降解菌群的方法。?

背景技術

聯苯（Biphenyl）天然存在于煤焦油、天然氣、原油中，通過化石燃料的燃燒進入環境中。在工業生產中，聯苯經單質碘和氯化鐵催化，可產生209種同系物，這一類化合物稱為多氯聯苯（Polychlorinated?biphenyls,簡稱PCBs）。PCBs因具有較好的阻燃性、高絕緣性及熱穩定性，曾被廣泛應用于變壓器、電容器絕緣油、燃料分散劑、潤滑劑、增塑劑和涂料等。PCBs作為12種持久性有機污染物（POPs）之一，由于環境持久性及“三致”效應而成為目前廣泛關注的一種典型異生型有機污染物。由于PCBs屬于難降解的異生型有機物，可在自然環境中存在數十年以上，因此，雖然PCBs已禁用多年，但它所造成的環境污染問題隨著研究的深入而日益突出。由于PCBs獨特的化學穩定性，傳統的物理和化學方法因存在低效、二次污染等問題而成為應用瓶頸，微生物作為大量存在的自然資源，且微生物降解治理技術具有安全、高效、經濟等特點，因此，PCBs污染環境的微生物修復技術具有較好的應用前景。?

PCBs污染環境的微生物修復以礦化或共代謝兩種方式進行。一些低氯PCBs可以作為微生物自身生長和繁殖所需的碳源及能源而進行好氧降解。而對于高氯（氯取代數≥5）PCBs，需經厭氧脫氯轉化為低氯PCBs，才能進行好氧降解。其降解途徑為：由雙加氧酶對2,3位進行氧化，脫氫得到鄰苯二酚，再由開環反應的得到苯甲酸。這種代謝途徑類似于其他芳香族化合物，如甲苯，聯苯。且聯苯降解菌在PCBs共代謝中發揮重要作用，大多數聯苯降解菌已被證實同樣具有降解PCB同系物的作用。另外，在篩選PCBs降解菌時，一般以聯苯為唯一碳源，先篩選能利用聯苯的菌株，然后再檢驗其對PCB同系物的降解性能。?

雖然微生物修復PCBs具有很大的潛力，且進行了大量的研究工作，但目前大多仍限于實驗室研究階段。PCBs高效降解功能菌種資源匱乏成為其推廣應用的最大瓶頸。另外，實驗室獲得的高效降解菌往往在實際修復場地呈現低降解活性，甚至失活的現象?，F今，構建PCBs降解工程菌及固定化降解酶雖然是構建高效PCBs降解菌的途徑，但存在很多問題，如宿主細胞的選擇、基因水平轉移及固定化成本高等。?

因此，如何從作為自然環境中絕大部分（90%～99%）微生物資源的活的但非可培養的狀態（“viable?but?non-culturable”，簡稱VBNC）菌群中，尋找潛在PCBs和聯苯降解菌群，提高菌株的降解效能成為打破微生物修復技術在PCBs污染環境中應用瓶頸的關鍵所在。藤黃球菌復蘇促進因子（resuscitation-promoting?factor，Rpf）的發現是VBNC狀態菌復蘇的重要突破。藤黃球菌Rpf不僅可以復蘇多種近緣的高GC革蘭氏陽性菌，如：結核分枝桿菌（Mycobacterium?tuberculosis）、牛分枝桿菌（Mycobacterium?bovis）、堪薩斯分枝桿菌（Mycobacterium?kansasii），恥垢分枝桿菌（Mycobacterium?smegmatis）和鳥分枝桿菌（Mycobacterium?avium）等。同時，對低GC革蘭氏陽性菌及部分革蘭氏陰性菌（Curvibacter?fontana?sp.）也有較好的復蘇促進功能。目前，對于Rpf復蘇及促進作用的關注，主要集中于醫學、流行病學流域，而未從微生物資源及環境功能角度展開研究。?

綜上所述，利用含Rpf的促進劑SRpf（Supernant?from?Micrococcus?luteus?containing?Rpf）不僅可以用于富集高效聯苯降解菌群，提高菌群的降解效能，成為獲得高效聯苯降解菌群的關鍵突破。另外，促進劑SRpf亦可用于促進其它有機污染物降解菌群的生長，為探索PCBs、PAHs等污染環境中潛在降解菌群，提供一種安全、廉價、高效的方法。?

發明內容

本發明的目的是針對現有PCBs污染環境的微生物修復技術中存在的菌種降解效能低、生長速度慢，耐受濃度低的不足，提供一種利用促進劑SRpf富集高效聯苯降解菌群的方法。該方法操作簡便、高效、無二次污染。?

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：一種利用促進劑SRpf富集高效聯苯降解菌群的方法，包括以下步驟：?