[發明專利]一種大菱鲆CC趨化因子的應用

無效

• 申請號: 201310254079.6
• 申請日: 2013-06-25
• 公開（公告）號: CN103349778A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發明（設計）人: 孫黎;陳騁;胡永華
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: A61K38/19
• 分類號: A61K38/19;A61P31/04;A61P31/12
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體的說是一種大菱鲆CC趨化因子的應用。

背景技術

CC趨化因子是趨化因子家族的成員。該類趨化因子的特點是一般具有四個保守的半胱氨酸位點，其中第二個和第三個半胱氨酸位點相互毗鄰，形成CC結構域，是高級結構形成和相關生物功能實現的基礎。CC趨化因子是一個約為12kDa的分泌蛋白，在免疫相關器官及免疫細胞中有均有分泌，通過與其靶細胞表面的受體相結合行使多種功能，包括指導淋巴細胞再循環和歸巢，激活和趨化樹突狀細胞，趨化B細胞等。在哺乳動物中，當受到外源刺激時（如病原感染），細胞會快速合成并分泌CC趨化因子至胞外，行使趨化和激活免疫細胞的功能，直接或間接地參與炎癥反應并發揮消除入侵微生物的作用，從而影響機體的免疫應答。因此，CC趨化因子對于機體發揮抗感染免疫應答具有重要的作用。

發明內容

本發明目的在于提供一種大菱鲆CC趨化因子的應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種大菱鲆CC趨化因子的應用：趨化因子可作為抗細菌或病毒感染的蛋白。

所述細菌為遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella?tarda)；所述病毒為細胞腫大病毒（megalocytivirus）。

應用方法：將純化的重組趨化因子在PBS中稀釋至200ug/ml，即為趨化因子稀釋液；將趨化因子稀釋液以0.1ml/每條魚的劑量腹腔注射大菱鲆。

本發明具有如下優點：本發明的CC趨化因子能夠顯著抑制魚類病原性細菌和病毒侵染。

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的經純化的CC趨化因子蛋白電泳檢測圖。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步說明。實施例旨在對本發明進行舉例描述，而非以任何形式對本發明進行限制。

在本發明實施例中所涉及到的常規性實驗方法均采用如下方法：

1.質粒提取、DNA(PCR)產物純化、DNA片段從凝膠中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相應試劑盒。

2.大腸桿菌用Hanahan方法（Sambrook?and?Russell:Molecular?Cloning:A?Laboratory?Mannual.Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press?2001）。

3.所有限制性內切酶和連接酶皆購自于“紐英倫生物技術有限公司”，北京。

實施例1

重組趨化因子的制備：

1）質粒pCCL19的構建：

以大菱鲆cDNA為模板，用引物F1和R1進行PCR擴增趨化因子基因（該基因序列已公開：GenBank?accession?No.DQ339042）。PCR條件為：94℃60s預變性模板DNA,然后94°C40s,55°C60s,72°C60s,5個循環后改為94°C40s,65°C60s,72°C60s,30個循環后再在72°C延伸反應7－10min。PCR產物用天根DNA產物純化試劑盒純化。將載體pET259（pET259構建過程參見Zheng?W,Hu?Y,Zhang?M,Sun?L.Analysis?of?the?expression?and?antioxidative?property?of?a?peroxiredoxin6?from?Scophthalmus?maximus.Fish?Shellfish?Immunol.2010;29(2):305–311.）用SwaI酶切后回收5.4kb片段，將其與上述純化的PCR片段用T4DNA連接酶于室溫連接2－4小時，連接液轉化入大腸桿菌DH5a，在含卡那霉素（30ug/ml）的LB培養基培養18－24小時,篩選轉化子提取質粒，即為質粒pCCL19。

所述LB液體培養基組成成分按重量百分比計：1.0%蛋白胨,0.5%酵母粉,1.0%氯化鈉,97.5％蒸餾水。所述F1為5’-CCCGGGATGCAGATTCCCATGGACTGC-3’；R1為5’-CCCGGGCACGTGCTTCACTCTGA-3’。

2）重組趨化因子的表達純化