[發明專利]一種用于測定降鈣素原的膠乳增強免疫比濁試劑盒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310253612.7
• 申請日: 2013-06-24
• 公開（公告）號: CN104237525A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 金鑫;曾濱
• 申請（專利權）人: 北京美康生物技術研究中心有限責任公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N21/82
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一種用于測定降鈣素原的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于所述的試劑盒包括稀釋液、膠乳制劑、空白液、校準品和質控品；其中所述的膠乳制劑中含有分別偶聯了PCT單克隆抗體以及PCT多克隆抗體的不同粒徑大小的羧基化的聚苯乙烯膠乳。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，偶聯了PCT單克隆抗體的羧基化的聚苯乙烯膠乳的粒徑為76nm，偶聯了PCT多克隆抗體的羧基化的聚苯乙烯膠乳的粒徑為187nm。

3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的稀釋液為含有2M?NaCl，2％（w/w）PEG20000，0.5%（w/w）BSA，0.1%（w/w）proclin-300的0.05M?Tris-HCl緩沖液，pH=8.4。

4.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的膠乳制劑是按照以下方法制備得到的：

（1）羧基化的聚苯乙烯膠乳活化

10mg/ml的羧基化的聚苯乙烯膠乳1ml中加入50mM，PH6.1MES溶解的1mg?EDC（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽）和10mgNHS（N-羥基琥珀酰亞胺）混勻活化60分鐘，離心8000rpm棄去上清，沉淀用PH7.4的50mM?PBS重懸；按照上述方法分別制備得到了粒徑為76nm和187nm活化后的羧基化的聚苯乙烯膠乳；

（2）偶聯了PCT單克隆抗體的羧基化的聚苯乙烯膠乳的制備

將1mg?PCT單克隆抗體加入2ml濃度為10mg/ml的粒徑為76nm膠乳溶液中，室溫混勻2-4小時，2-8℃8000rpm離心15min，收集上清液備用，加入含有5mg?BSA的50mM?PBS，室溫混勻1-2小時；2-8℃8000rpm離心15min，棄掉上清液，沉淀中加入5ml50mM的甘氨酸，充分混勻30min；2-8℃8000rpm離心15min，棄掉上清液，沉淀使用5ml?Tris-HCl緩沖液復融膠乳；

（3）偶聯了PCT多克隆抗體的羧基化的聚苯乙烯膠乳的制備

將0.5mg?PCT多克隆抗體加入2ml濃度為10mg/ml的粒徑為187nm的膠乳溶液中，室溫混勻2－4小時，2-8℃8000rpm離心15min，收集上清液備用，加入含有2.5mgBSA的50mM?PBS，室溫混勻1-2小時；2-8℃8000rpm離心15min，棄掉上清液，沉淀中加入5ml50mM的甘氨酸，充分混勻30min；2-8℃8000rpm離心15min，棄掉上清液，沉淀使用5ml?Tris-HCl緩沖液復融膠乳；

（4）將兩種膠乳溶液進行混合。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于步驟（4）中，是將兩種粒徑的膠乳試劑進行體積比1：1混合，充分混勻后備用。

6.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于步驟（2）或步驟（3）中所述的緩沖液為含有1%（w/w）BSA，0.05％（v/v）吐溫，0.1%（w/w）海藻糖、0.1g/L羧甲基纖維素鈉，0.1%（w/w）NaN3的0.05M?Tris-HCl緩沖液，pH=7.4。

7.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的空白液為0.05M?PBS磷酸緩沖液。

8.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的校準品包括降鈣素原濃度分別為0、0.1、0.5、2.5、10、30μg/L的校準品。

9.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的質控品中降鈣素原的濃度為0.21-0.29μg/L。

10.權利要求1-9任一項所述的試劑盒在制備檢測降鈣素原試劑中的應用。