[發明專利]轉基因玉米品系MLPA檢測的探針及制備長探針的引物

有效

• 申請號: 201310252962.1
• 申請日: 2013-06-24
• 公開（公告）號: CN103397086A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 凌杏園;陳枝楠;潘廣;章桂明;向才玉;康林;程穎慧;龍海;鄭耘;陳菲
• 申請（專利權）人: 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 彭家恩;彭愿潔

1.一種轉基因玉米品系MLPA檢測的探針，其特征在于：所述探針包括第一組探針至第十組探針中的至少一組，每組探針中分別含有長探針和短探針，長探針的5’端具有磷酸化修飾；

第一組探針的短探針含有Seq?ID?No.1所示序列，長探針含有Seq?ID?No.2所示序列；

第二組探針的短探針含有Seq?ID?No.3所示序列，長探針含有Seq?ID?No.4所示序列；

第三組探針的短探針含有Seq?ID?No.5所示序列，長探針含有Seq?ID?No.6所示序列；

第四組探針的短探針含有Seq?ID?No.7所示序列，長探針含有Seq?ID?No.8所示序列；

第五組探針的短探針含有Seq?ID?No.9所示序列，長探針含有Seq?ID?No.10所示序列；

第六組探針的短探針含有Seq?ID?No.11所示序列，長探針含有Seq?ID?No.12所示序列；

第七組探針的短探針含有Seq?ID?No.13所示序列，長探針含有Seq?ID?No.14所示序列；

第八組探針的短探針含有Seq?ID?No.15所示序列，長探針含有Seq?ID?No.16所示序列；

第九組探針的短探針含有Seq?ID?No.17所示序列，長探針含有Seq?ID?No.18所示序列；

第十組探針的短探針含有Seq?ID?No.19所示序列，長探針含有Seq?ID?No.20所示序列。

2.根據權利要求1所述的探針，其特征在于：所述第一組探針至第十組探針依序為檢測轉基因玉米品系TC1507、Bt176、T25、NK603、MON863、MON89034、MIR604、GA21、Bt11和59122的探針。

3.一種轉基因玉米品系的MLPA檢測方法，其特征在于：采用權利要求1或2所述的探針以受檢樣品的DNA為模板進行雜交。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于：還包括采用一對通用引物對雜交后連接起來的長探針和短探針進行PCR擴增，所述通用引物的上游/下游引物分別含有Seq?ID?No.21和Seq?ID?No.22所示序列。

5.一種制備權利要求1或2所述的長探針的引物，其特征在于：所述引物包括第一引物組至第七引物組中的至少一組，每個引物組中分別含有非限定引物和限定引物，非限定引物的5’端具有磷酸化修飾；

第一引物組的非限定引物含有Seq?ID?No.23所示序列，限定引物含有Seq?ID?No.24所示序列；

第二引物組的非限定引物含有Seq?ID?No.25所示序列，限定引物含有Seq?ID?No.26所示序列；

第三引物組的非限定引物含有Seq?ID?No.27所示序列，限定引物含有Seq?ID?No.28所示序列；

第四引物組的非限定引物含有Seq?ID?No.29所示序列，限定引物含有Seq?ID?No.30所示序列；

第五引物組的非限定引物含有Seq?ID?No.31所示序列，限定引物含有Seq?ID?No.32所示序列；

第六引物組的非限定引物含有Seq?ID?No.33所示序列，限定引物含有Seq?ID?No.34所示序列；

第七引物組的非限定引物含有Seq?ID?No.35所示序列，限定引物含有Seq?ID?No.36所示序列。

6.根據權利要求5所述的引物，其特征在于：所述第一引物組至第七引物組依序為制備第四組探針至第十組探針的長探針的引物組。

7.一種用于轉基因玉米品系MLPA檢測的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有權利要求1或2所述的探針。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還含有一對通用引物，所述通用引物的上游/下游引物分別含有Seq?ID?No.21和Seq?ID?No.22所示序列。

9.根據權利要求7或8所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還含有DNA雜交緩沖液、DNA連接酶和PCR反應緩沖液中的至少一種。

10.一種用于制備權利要求1或2所述的長探針的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有權利要求5或6所述的引物。