[發明專利]一種人體免疫缺陷病毒抗體檢測試紙的制備方法

無效

• 申請號: 201310251895.1
• 申請日: 2013-06-24
• 公開（公告）號: CN103336113A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 程柯
• 申請（專利權）人: 蘇州萬木春生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 劉述生

1.一種人體免疫缺陷病毒抗體檢測試紙的制備方法，其特征在于，包括步驟為：（1）將三羥甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，調節pH值至8-9，得到金標重懸液，用0.01M磷酸二氫鈉溶液調節0.01M磷酸氫二鈉溶液的pH值至7-8，得到包被緩沖液；

（2）往攪拌的膠體金中加入0.2M碳酸鉀，調節pH，加入待標記物并攪拌，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，離心得到沉淀，所述沉淀用所述金標重懸液重懸至離心前體積的1/10，其中所述待標記物為P74重組抗原、P44重組抗原或兔IgG單抗，得到P74重組抗原標記、P44重組抗原標記或兔IgG單抗標記；

（3）用包被緩沖液稀釋P57重組抗原和P36重組抗原混合物得到檢測線包被液，用包被緩沖液稀釋羊抗兔IgG多抗稀釋得到對照線包被液；

（4）通過點膜噴金設備用所述P74重組抗原標記和所述P44重組抗原標記的混合液對金墊噴金得到第一金墊，用所述兔IgG單抗標記對金墊噴金得到第二金墊，用所述檢測線包被液和所述對照線包被液分別在粘有硝酸纖維素膜的聚氯乙烯底板上劃線，得到點膜的聚氯乙烯底板；

（5）將樣品墊、第一金墊、第二金墊、點膜的聚氯乙烯底板和吸水紙組裝在一起，切割成人體免疫缺陷病毒抗體檢測試紙。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述三羥甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容總體積的比例為0.24g：20g：5g：1g：100mL。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述金標重懸液的pH值用1M鹽酸調節至8.5，所述包被緩沖液的pH值調節至7.4。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述膠體金是過濾過的，所述攪拌是置于磁力攪拌器上，往攪拌的膠體金中加入0.2M碳酸鉀，調節pH并攪拌5min，加入待標記物并攪拌60min，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，攪拌30min，在4℃、轉速為11000r/min的條件下離心60分鐘，沉淀用所述金標重懸液重懸至離心前體積的1/10，得到標記物。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述0.2M碳酸鉀和所述P74重組抗原的比例為9.5uL/mL:16μg/mL，所述0.2M碳酸鉀和所述P44重組抗原的比例為9.5uL/mL:8μg/mL，所述0.2M碳酸鉀和所述兔IgG單抗的比例為8uL/mL:10μg/mL，所述牛血清白蛋白的加入量占總體積的1%。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中所述檢測線包被液中所述P57重組抗原的濃度為1.6mg/mL，所述P36重組抗原的濃度為2.4mg/mL，所述對照線包被液中所述羊抗兔IgG多抗的濃度為2mg/mL。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（4）中所述金墊采用玻璃纖維膜，在噴金前用金墊處理液浸泡10min后干燥，其中所述金墊處理液是十二烷基聚乙二醇醚加入水中定容得到，所述十二烷基聚乙二醇醚和定容總體積的比例為1g：100mL。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（5）中所述樣品墊采用玻璃纖維膜，在使用前用樣品墊處理液浸泡10min后干燥，其中所述樣品墊處理液是將比例為0.2g：6.06g：1.15g：0.1g：1.25g：1g:??10g的磷酸二氫鉀、三羥甲基氨基甲烷、磷酸氫二鈉、硫柳汞、十二烷基硫酸鈉、乙二胺四乙酸和牛血清白蛋白溶于水中定容到1L體積。