[發明專利]一種新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法

無效

• 申請號: 201310250613.6
• 申請日: 2013-06-24
• 公開（公告）號: CN103283606A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 鄧群仙;袁航;王小蓉;王永清;陳濤;羅婭;杜寒梅
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.一種新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述離體培養方法包括以下步驟：

雜種獲得、雜種預處理、雜種無菌材料的建立、雜種胚繼代增殖培養、雜種胚壯苗培養、雜種胚生根培養、煉苗移栽、移栽田間。

2.如權利要求1所述新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述雜種獲得是將父本鈴鐺花期的花朵，帶回室內摘下花藥，置于20℃的條件下進行干燥爆粉，從花藥中裂散出的花粉收集于干凈的小瓶中，分別貼上標簽后置于干燥的環境中保存備用，并在授粉前進行花粉的活力檢測；同樣在母本盛花期，選擇鈴鐺花期的母本花朵去雄，進行人工授粉，授粉后立即套上硫酸紙袋，2～3周后去袋，于雜種硬核期和果實成熟時采摘帶核果實。

3.如權利要求1所述新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述雜種預處理是將采摘的帶核果實去除果肉，取果核沖洗干凈，晾干后密封置于4℃條件下貯存30d。

4.如權利要求1所述新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述雜種無菌材料的建立是將預處理的雜種在室溫環境中小心搗破果核，取出種仁，用70%的酒精對種仁浸潤1min，再用0.1%的HgCl₂表面滅菌10～12min，無菌水沖洗4～5次，然后用無菌鑷子取出已滅菌種仁放于無菌培養皿中的無菌濾紙上，再用無菌解剖針或刀片小心去掉種仁上的種皮，最后將去皮種仁接種于初代培養基上先暗培養7d再轉入光照條件下培養，培養條件為光照時間12h/d，光照強度2000Lx，溫度23～25℃。

5.如權利要求1所述新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述雜種胚繼代增殖培養，應將雜種胚初代培養萌發的無菌芽苗，剪去子葉和根系轉接入到1/2MS+BA0.5mg/L+IBA0.3mg/L+GA₃1.0mg/L+CH1.0mg/L+Vc10.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L繼代增殖培養基中，在光照時間12h/d、光照強度2000Lx、溫度23～25℃環境中培養30d可增殖4倍。

6.如權利要求1所述新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述雜種胚壯苗培養是將繼代培養的雜種胚組培苗接種于不添加任何植物生長調節劑的組分為MS+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L壯苗培養基上，在光照時間12h/d、光照強度2000Lx、溫度23～25℃環境中進行壯苗培養30d。

7.如權利要求1所述新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述雜種胚生根培養是將經過壯苗培養后，將株高1.0cm以上、生長健壯的芽苗接種于組分為1/2MS+IBA0.3mg/L+蔗糖15g/L+瓊脂5g/L的生根培養基中，先弱光培養5d，再轉入光照時間12h/d、光照強度2000Lx、溫度23～25℃條件下培養30d。

8.如權利要求1所述新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述煉苗移栽將生根7條以上、真葉數7片以上、株高1.5cm以上的健壯雜種胚培苗先在無菌培養室內逐步去除瓶膜煉苗3～5d，再轉到室溫環境下煉苗3～5d。

9.如權利要求1所述新型櫻桃種內、種間雜種胚的離體培養方法，其特征在于，所述移栽田間是待雜種胚組培苗移栽蛭石基質50～60d、有新葉長出時，可將其從花盆中移栽到大棚或田間育苗地。