[發明專利]一種分級提取藍藻胞外聚合物的方法

有效

• 申請號: 201310248303.0
• 申請日: 2013-06-20
• 公開（公告）號: CN103304626A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 江和龍;徐華成
• 申請（專利權）人: 中國科學院南京地理與湖泊研究所
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C08B37/00
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓

1.一種分級提取藍藻胞外聚合物的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）藍藻胞外聚合物分級提取

取藍藻細胞，經低溫低速離心濃縮后取上清液即為可溶性胞外聚合物，備用；沉淀物加入NaCl緩沖溶液至原體積，低溫中速離心濃縮，取上清液即為松散結合型胞外聚合物，備用；沉淀物加入NaCl緩沖溶液至原體積，在弱堿及熱浴環境下進行機械力攪拌，再經低溫高速離心濃縮，取上清液即為緊密結合型胞外聚合物；

（2）：胞外聚合物各級組分純化

將可溶性胞外聚合物、松散結合型胞外聚合物和緊密結合型胞外聚合物分別經濾膜過濾及低壓濃縮后，再進行乙醇沉淀，沉淀物經透析脫鹽及冷凍干燥，即得純化的藍藻胞外聚合物。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的藍藻為室內培養的藍綠藻或野外水體藍藻。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1中低溫低速離心的溫度為0~4℃、離心力為1500~2500g，離心時間為10~15min；所述低溫中速離心的溫度為0~4℃、離心力為4500~5000g，離心時間為10~15min；所述的低溫高速離心的溫度為0~4℃、離心力為15000~17000g，離心時間為10~15min。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述步驟1中低溫低速離心的溫度為2~3℃，離心力為2200~2300g；所述低溫中速離心的溫度為2~3℃，離心力為4750~4800g；所述的低溫高速離心的溫度為2~3℃，離心力為15500~16500g。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述的NaCl緩沖溶液為質量濃度為0.04~0.1%的NaCl溶液。

6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于：所述的弱堿及熱浴環境是指沉淀物加入NaCl緩沖溶液至原體積后，向其中加入質量分數為35~45%的NaOH或KOH溶液，使提取液的pH值維持在8~9；于溫度為55~65℃的熱水浴中熱浴25~35min，并進行機械力攪拌，攪拌速度為30~80rpm。

7.根據權利要求1-6任一項所述的方法，其特征在于：所述步驟2中的濾膜是指孔徑小于8μm微孔濾膜；所述的低壓濃縮的壓力為0.8~1.0MPa，濃縮溫度不超過60℃，濃縮至原體積的1/3~1/5。

8.根據權利要求1-7任一項所述的方法，其特征在于：所述的乙醇沉淀是指向胞外聚合物濃縮液中添加4~5倍體積的無水乙醇，0~4℃靜置沉降24h以上。

9.根據權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于：所述的透析脫鹽是指采用分子量<14000Da的透析袋去除小分子有機物及無機鹽離子雜質，透析時間>60h，透析溫度為0~4℃。

10.根據權利要求1-9任一項所述的方法，其特征在于：所述的冷凍干燥中，干燥壓力<0.?2MPa，干燥溫度為-40~-60℃。