[發(fā)明專利]一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的新型海膽黃多糖的制備方法及結(jié)構(gòu)鑒定

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310248186.8
• 申請(qǐng)日: 2013-06-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103382229A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 奚濤;馬益華;邢瑩瑩;陸園園
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/02
• 分類號(hào): C08B37/02;A61K31/716;A61P37/02;A61P35/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及一種具有α-1，4糖苷鍵主鏈和α-1，3糖苷鍵側(cè)鏈的海膽黃多糖及其制備方法和用途；屬于天然高分子領(lǐng)域。

背景技術(shù)

雌性海膽的生殖腺即海膽黃為名貴的海產(chǎn)珍品，被稱為“云丹”，國(guó)際市場(chǎng)上價(jià)格昂貴，有“黃色鉆石”之稱。海膽黃含有豐富的蛋白質(zhì)，多糖，脂肪酸，維生素及各種微量元素等多種對(duì)人體有益的營(yíng)養(yǎng)成分。因此海膽黃不僅具有較高的食用價(jià)值，同時(shí)還具有極好的藥用價(jià)值，尤其在增強(qiáng)人體免疫力，防治心血管疾病方面有較好的效果。應(yīng)用海膽治療各種腫毒的方法在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中早有記載。隨著科技的進(jìn)步，海膽的抗腫瘤作用已經(jīng)得到了當(dāng)今醫(yī)學(xué)的肯定。

國(guó)外對(duì)海膽的研究始于上世紀(jì)60年代，早期的研究主要集中在對(duì)海膽棘色素及海膽內(nèi)生或共生菌代謝產(chǎn)物方面的研究。1981年，George首次從有毒的綠海膽(S.droebachiensis)中分離得到兩種具有抗腫瘤活性的糖蛋白。自此開(kāi)始，越來(lái)越多的學(xué)者從不同種類的海膽的外殼，內(nèi)臟，卵等來(lái)源中發(fā)現(xiàn)了多種具有抗腫瘤，免疫調(diào)節(jié)等不同生物活性的多糖，糖蛋白，糖脂等化合物。

我國(guó)是海膽資源比較豐富的國(guó)家，而多糖是海膽黃中重要的營(yíng)養(yǎng)成分。通過(guò)人們對(duì)藥用多糖作用機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，從天然產(chǎn)物中分離得到的多糖發(fā)揮抗腫瘤等生理活性，往往是通過(guò)多糖分子作為免疫調(diào)節(jié)劑而發(fā)揮作用的。多糖不僅僅能夠激活多種免疫細(xì)胞，同時(shí)對(duì)正常的機(jī)體細(xì)胞沒(méi)有毒副作用，因而作為一種加強(qiáng)生物免疫反應(yīng)或抗體生成及激活的免疫調(diào)節(jié)劑應(yīng)用于癌癥和免疫缺損疾病的臨床治療方面具有巨大的研究潛力。相應(yīng)地，多糖的研究范圍也不斷擴(kuò)大，不僅僅包括了多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析的研究，也逐漸發(fā)展到了多糖的構(gòu)效關(guān)系，作用機(jī)制，臨床應(yīng)用等方面。隨著研究的不斷深入，多糖化合物吸引了越來(lái)越多學(xué)者的注意，其生物活性的研究得到了飛速發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是從煙臺(tái)光棘球海膽的生殖腺中提取出一種多糖，鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)并確定其具體的活性用途。

本發(fā)明涉及海膽黃多糖結(jié)構(gòu)的鑒定，即從光棘球海膽黃中分離得到的海膽黃多糖，經(jīng)單糖組成分析結(jié)果表明，海膽黃多糖為一種葡聚糖，通過(guò)化學(xué)分析和光譜分析推斷出本發(fā)明中海膽黃多糖的重復(fù)單元結(jié)構(gòu)如圖1所示，主鏈由1→4糖苷鍵組成，側(cè)鏈由1→3糖苷鍵組成，糖苷鍵殘基為α構(gòu)型。表明本發(fā)明所涉及的海膽黃多糖是從煙臺(tái)光棘球海膽中首次分離得到的一種結(jié)構(gòu)新穎的葡聚糖。

上述海膽黃多糖在200-800μg/mL時(shí)對(duì)脾淋巴細(xì)胞有明顯的增殖作用，并且呈一定的劑量依賴性。另外海膽黃多糖可顯著促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力，在100-400μg/mL濃度范圍內(nèi)，與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，并且可以顯著地刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖。

附圖說(shuō)明

圖1是海膽黃多糖的重復(fù)單元

圖2是海膽黃多糖分離提取流程圖

圖3是海膽黃多糖高效液相(HPLC)色譜圖

圖4是海膽黃多糖水解產(chǎn)物薄層層析圖

圖5是海膽黃多糖的糖醇乙酸酯的氣相(GC)色譜圖

圖6是NaIO₄溶液的濃度-吸光值標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖7是海膽黃多糖的Smith降解產(chǎn)物的氣相色譜圖

圖8是海膽黃多糖完全甲基化后的紅外譜圖

圖9是完全甲基化的海膽黃多糖的糖醇乙酸酯GC-MS聯(lián)機(jī)分析中的氣相(GC)色譜圖

圖10是海膽黃多糖部分酸水解后的糖醇乙酸酯的氣相(GC)色譜圖

圖11是海膽黃多糖紫外分光圖譜

圖12是海膽黃多糖紅外分光圖譜

圖13是海膽黃多糖的¹HNMR圖譜

圖14是海膽黃多糖的¹³CNMR圖譜

圖15是海膽黃多糖對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖作用圖

圖16是海膽黃多糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖作用圖

圖17是海膽黃多糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7吞噬中性紅的影響圖

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一、提取流程

將新鮮的海膽切開(kāi)，小心剝離海膽黃，紗布過(guò)濾除去海膽黃中的水分。向收集到的500g海膽黃中加入等體積的丙酮，攪拌使之與丙酮充分接觸，靜置30min，棄上層丙酮，反復(fù)數(shù)次至丙酮層基本無(wú)色為止，最后將丙酮減壓揮干，得海膽黃多糖丙酮粉200g。海膽黃丙酮粉置于2L蒸餾水中，90℃提取5小時(shí)，反復(fù)3次，得水提液共6L，50℃減壓濃縮至1.2L。