[發明專利]一種具有免疫調節作用的新型海膽黃多糖的制備方法及結構鑒定

有效

• 申請號: 201310248186.8
• 申請日: 2013-06-21
• 公開（公告）號: CN103382229A
• 公開（公告）日: 2013-11-06
• 發明（設計）人: 奚濤;馬益華;邢瑩瑩;陸園園
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02;A61K31/716;A61P37/02;A61P35/00
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技術領域

本發明具體涉及一種具有α-1，4糖苷鍵主鏈和α-1，3糖苷鍵側鏈的海膽黃多糖及其制備方法和用途；屬于天然高分子領域。

背景技術

雌性海膽的生殖腺即海膽黃為名貴的海產珍品，被稱為“云丹”，國際市場上價格昂貴，有“黃色鉆石”之稱。海膽黃含有豐富的蛋白質，多糖，脂肪酸，維生素及各種微量元素等多種對人體有益的營養成分。因此海膽黃不僅具有較高的食用價值，同時還具有極好的藥用價值，尤其在增強人體免疫力，防治心血管疾病方面有較好的效果。應用海膽治療各種腫毒的方法在傳統醫學中早有記載。隨著科技的進步，海膽的抗腫瘤作用已經得到了當今醫學的肯定。

國外對海膽的研究始于上世紀60年代，早期的研究主要集中在對海膽棘色素及海膽內生或共生菌代謝產物方面的研究。1981年，George首次從有毒的綠海膽(S.droebachiensis)中分離得到兩種具有抗腫瘤活性的糖蛋白。自此開始，越來越多的學者從不同種類的海膽的外殼，內臟，卵等來源中發現了多種具有抗腫瘤，免疫調節等不同生物活性的多糖，糖蛋白，糖脂等化合物。

我國是海膽資源比較豐富的國家，而多糖是海膽黃中重要的營養成分。通過人們對藥用多糖作用機制的研究發現，從天然產物中分離得到的多糖發揮抗腫瘤等生理活性，往往是通過多糖分子作為免疫調節劑而發揮作用的。多糖不僅僅能夠激活多種免疫細胞，同時對正常的機體細胞沒有毒副作用，因而作為一種加強生物免疫反應或抗體生成及激活的免疫調節劑應用于癌癥和免疫缺損疾病的臨床治療方面具有巨大的研究潛力。相應地，多糖的研究范圍也不斷擴大，不僅僅包括了多糖的分離純化、結構分析的研究，也逐漸發展到了多糖的構效關系，作用機制，臨床應用等方面。隨著研究的不斷深入，多糖化合物吸引了越來越多學者的注意，其生物活性的研究得到了飛速發展。

發明內容

本發明的目的是從煙臺光棘球海膽的生殖腺中提取出一種多糖，鑒定其化學結構并確定其具體的活性用途。

本發明涉及海膽黃多糖結構的鑒定，即從光棘球海膽黃中分離得到的海膽黃多糖，經單糖組成分析結果表明，海膽黃多糖為一種葡聚糖，通過化學分析和光譜分析推斷出本發明中海膽黃多糖的重復單元結構如圖1所示，主鏈由1→4糖苷鍵組成，側鏈由1→3糖苷鍵組成，糖苷鍵殘基為α構型。表明本發明所涉及的海膽黃多糖是從煙臺光棘球海膽中首次分離得到的一種結構新穎的葡聚糖。

上述海膽黃多糖在200-800μg/mL時對脾淋巴細胞有明顯的增殖作用，并且呈一定的劑量依賴性。另外海膽黃多糖可顯著促進小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅的能力，在100-400μg/mL濃度范圍內，與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，并且可以顯著地刺激小鼠腹腔巨噬細胞RAW264.7增殖。

附圖說明

圖1是海膽黃多糖的重復單元

圖2是海膽黃多糖分離提取流程圖

圖3是海膽黃多糖高效液相(HPLC)色譜圖

圖4是海膽黃多糖水解產物薄層層析圖

圖5是海膽黃多糖的糖醇乙酸酯的氣相(GC)色譜圖

圖6是NaIO₄溶液的濃度-吸光值標準曲線

圖7是海膽黃多糖的Smith降解產物的氣相色譜圖

圖8是海膽黃多糖完全甲基化后的紅外譜圖

圖9是完全甲基化的海膽黃多糖的糖醇乙酸酯GC-MS聯機分析中的氣相(GC)色譜圖

圖10是海膽黃多糖部分酸水解后的糖醇乙酸酯的氣相(GC)色譜圖

圖11是海膽黃多糖紫外分光圖譜

圖12是海膽黃多糖紅外分光圖譜

圖13是海膽黃多糖的¹HNMR圖譜

圖14是海膽黃多糖的¹³CNMR圖譜

圖15是海膽黃多糖對小鼠脾淋巴細胞的增殖作用圖

圖16是海膽黃多糖對小鼠巨噬細胞RAW264.7增殖作用圖

圖17是海膽黃多糖對小鼠巨噬細胞RAW264.7吞噬中性紅的影響圖

具體實施方式

實施例1

一、提取流程

將新鮮的海膽切開，小心剝離海膽黃，紗布過濾除去海膽黃中的水分。向收集到的500g海膽黃中加入等體積的丙酮，攪拌使之與丙酮充分接觸，靜置30min，棄上層丙酮，反復數次至丙酮層基本無色為止，最后將丙酮減壓揮干，得海膽黃多糖丙酮粉200g。海膽黃丙酮粉置于2L蒸餾水中，90℃提取5小時，反復3次，得水提液共6L，50℃減壓濃縮至1.2L。