[發(fā)明專利]一種同時檢測水中四環(huán)素類抗生素的方法

無效

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• 申請日: 2013-06-20
• 公開（公告）號: CN103336080A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設計）人: 席北斗;薛成;丁京濤;高如泰;許其功;曹金玲;張媛
• 申請（專利權）人: 中國環(huán)境科學研究院
• 主分類號: G01N30/08
• 分類號: G01N30/08;G01N30/02
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 周長興

技術領域

本發(fā)明屬于水環(huán)境污染物的檢測技術領域，具體地涉及一種水體中同時檢測痕量四環(huán)素類抗生素的檢測方法，更具體地是針對地表水(河水)中痕量四環(huán)素、土霉素、金霉素的檢測方法。

背景技術

四環(huán)素類抗生素包括土霉素(OTC)、四環(huán)素(TC)和金霉素(CTC)等，屬廣普類抗生素藥物，由于其具有良好的殺菌或抑菌作用而廣泛用了防治動物和水產(chǎn)品的疾病感染。四環(huán)素類抗生素類物質(zhì)低劑量使用能夠促進畜禽的生長，高劑量使用能夠起到治療疾病的作用，因此在畜禽養(yǎng)殖中得到了廣泛的應用。四環(huán)素類抗生素作為人畜共用的廣譜性抗生素，在世界范圍內(nèi)使用量巨大。近年來，隨著養(yǎng)殖者們對畜禽養(yǎng)殖的經(jīng)濟利益追求和畜禽耐藥性的增加，抗生素類物質(zhì)的使用劑量不斷提高，甚至以不合理的高劑量使用。然而，濫用抗生素的不良影響和對人類的危害顯現(xiàn)越來越嚴重的趨勢，并逐漸成為人們普遍關注的一個社會熱點問題。人畜服用四環(huán)素類藥物后大部分以原形藥物排出，隨著糞便或其他途徑進入環(huán)境。四環(huán)素類抗生素有水溶性較好，在環(huán)境中不易生物降解等特點，隨著污水排放或地表徑流進入地表水使其容易在水環(huán)境中儲存和蓄積，是環(huán)境中主要抗生素污染源。由于其含量極低，檢測難，因此，需要尋求簡便、快速、準確檢測水體中四環(huán)素類抗生素的檢測方法，才能滿足日趨嚴格的殘留限量要求。

四環(huán)素類抗生素的殘留檢測方法有很多，如微生物法、酶聯(lián)免疫法、紫外分光光度法、熒光光度法和薄層色譜法(TLC)等，其中微生物法和酶聯(lián)免疫法存在特異性差，耗時長及操作繁瑣等缺點，而光度法和TLC法的測量靈敏度難以達到要求。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在定量分析時可以根據(jù)特征離子和由此特征離子斷裂產(chǎn)生的特征碎片作為某一目標化合物的指紋，將它從復雜機制的混合物樣品中篩選出來進行定量，保證了檢測的準確度和精確度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種水中痕量四環(huán)素類抗生素的檢測方法，其步驟包括：

1)水樣的預處理

水樣過濾除去懸浮物，調(diào)節(jié)水樣pH為2-4；

(2)濃縮富集

依次利用丙酮、甲醇、含乙酸銨的甲酸水溶液、超純水活化HLB固相萃取柱，取步驟1中的水樣過柱，將HLB固相萃取柱在氮氣保護下干燥，再用洗脫液洗脫HLB固相萃取柱，收集洗脫液在氮氣流下吹干，加入乙腈溶解殘留物；

(3)定量檢測痕量四環(huán)素類抗生素的濃度；

所述的四環(huán)素類抗生素為土霉素、四環(huán)素和金霉素。

所述的檢測方法，其中，步驟1中水樣過濾是用0.47μm的GF/F濾膜。

所述的檢測方法，其中，步驟1中是加入鹽酸或硫酸調(diào)節(jié)水樣pH。

所述的檢測方法，其中，步驟2中甲酸水溶液含有5mmol/L的乙酸銨。

所述的檢測方法，其中，步驟2中的水樣過柱控制流速小于1mL/min。

所述的檢測方法，其中，步驟2中洗脫HLB固相萃取柱的洗脫液流速小于1.0mL/min。

所述的檢測方法，其中，步驟2中的洗脫液為甲醇溶液。

所述的檢測方法，其中，步驟3是采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測四環(huán)素類抗生素的濃度，具體地是采用3200QTrap型液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀定量檢測，其中：色譜柱ZORBAX?Eclipse?XDB?C₁₈，4.6mm×150mm×5μm；3200QTrap型液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀質(zhì)譜條件如下：電離方式：ES(+)，離子噴射電壓：5500V，錐孔電壓：34V，源溫度：580℃。

本發(fā)明的有益效果是采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用對三種藥物同時進行定量測定，操作簡單易行，分析快速，一個樣品僅需5min左右。對目標化合物的選擇性強，定量精確，靈敏度高。尤其是一種環(huán)境友好、易于操作、富集倍數(shù)高、重現(xiàn)性好、能夠快速同時分析水體中多種藥物的方法。

附圖說明

圖1為本發(fā)明100ng/mL的三種四環(huán)素類抗生素混合標準品溶液的離子流圖。

圖2為四環(huán)素定量子離子標準曲線。

圖3為土霉素定量子離子標準曲線。

圖4為金霉素定量子離子標準曲線。

具體實施方式

本發(fā)明采用固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法實現(xiàn)對地表水中三種四環(huán)素類抗生素(四環(huán)素、土霉素和金霉素)進行檢測，與傳統(tǒng)檢測方法相比，實現(xiàn)了選擇性好、靈敏度高、操作簡單、分析時間短等特點。

本發(fā)明的的檢測方法如下：

(1)水樣預處理