[發明專利]從牛或豬胰臟中提取四種酶的生產工藝

有效

• 申請號: 201310246553.0
• 申請日: 2013-06-21
• 公開（公告）號: CN103275948A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 李相超;劉文浩;包前德門
• 申請（專利權）人: 赤峰市云淞科技發展有限責任公司
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N9/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從牛或豬胰臟中提取四種酶的生產工藝，它包括如下步驟：

(1)組織絞碎：將牛胰臟或者豬胰臟除去脂肪和結締組織，用清水洗凈，再用絞肉機絞碎；

(2)酸浸提取：將絞碎的胰臟中加入水和硫酸溶液，固液重量比為1∶3～5，pH值為2.4～2.8，室溫下攪拌浸提14～16小時，得浸提混合液；

(3)過濾分離：將浸提混合液過濾分離，收集提取濾液，棄去固形物廢渣；

(4)超濾濃縮；將提取濾液用兩級超濾膜過濾，用分子量為200，000～250，000D的超濾膜濾除大分子物質，用分子量為50，000～60，000D的超濾膜濾除小分子物質，收集濃縮提取液；

(5)一段鹽析：在濃縮提取液中，加入18％～20％(NH₄)₂SO₄W/V，析出結晶沉淀之后過濾，獲得脫氧核糖核酸酶鹽析物，收集一段鹽析濾液；

(6)二段鹽析：在一段鹽析濾液中，加入42％～48％(NH₄)₂SO₄W/V，析出結晶沉淀之后過濾，收集糜蛋白酶原、胰蛋白酶原和激肽原酶混合固形物，棄去二段鹽析濾液；

(7)溶解激活：將糜蛋白酶原、胰蛋白酶原和激肽原酶混合固形物用3～5倍的去離子水溶解，加入4％～6％CaCl₂W/V，在4℃～5℃下由Ca++離子激活糜蛋白酶原和胰蛋白酶原，當糜蛋白酶活性達到400u/mg或者胰蛋白酶活性達到2000u/mg時，用鹽酸調節pH值為3～3.5，終止激活，獲得含有沉淀物的三酶混合溶液；

(8)凈化過濾：將含有沉淀物的三酶混合溶液進行凈化過濾，濾除硫酸鈣等沉淀物，獲得凈化三酶混合溶液；

(9)脫鹽濃縮：將凈化三酶混合溶液用分子量50，000～60，000D的超濾膜和去離子水進行超濾脫鹽，使膜內三酶混合溶液電導率小于800s/cm，獲得三酶濃縮溶液；

(10)一段層析：使用裝填二乙酰氨基瓊脂糖凝膠的層析柱，在三酶濃縮溶液中加NaOH調節pH值到6～7，上樣、洗脫、收集一段層析通過液和一段層析洗脫液，一段層析洗脫液為純化的糜蛋白酶溶液；

(11)二段層析：使用裝填雙丙烯酰胺葡聚糖凝膠的層析柱，在一段層析通過液中加醋酸調節pH值到3～6，上樣、洗脫、收集二段層析通過液和二段層析洗脫液，二段層析洗脫液為純化的激肽原酶溶液，二段層析通過液為純化的胰蛋白酶溶液；

(12)步驟5獲得脫氧核糖核酸酶鹽析物，經過脫鹽濃縮和丙酮沉淀，獲得脫氧核糖核酸酶成品；

(13)步驟8得到的糜蛋白酶溶液，步驟9得到的胰蛋白酶溶液和激肽原酶溶液，分別經過脫鹽濃縮和凍干，獲得糜蛋白酶成品、胰蛋白酶成品和激肽原酶成品。

2.根據權利要求1所述的從牛或豬胰臟中提取四種酶的生產工藝，其特征在于：在所述的過濾分離、一段鹽析、二段鹽析和凈化過濾步驟中，分別采用板框過濾機進行過濾。

3.根據權利要求2所述的從牛或豬胰臟中提取四種酶的生產工藝，其特征在于：所述的過濾分離步驟還包括一個滾筒篩過濾步驟，利用滾筒篩濾除一部分大顆粒固形物，經過滾筒過濾的浸提混合液中加入助濾劑，再采用板框過濾機進行過濾。

4.根據權利要求3所述的從牛或豬胰臟中提取四種酶的生產工藝，其特征在于：所述的助濾劑是珍珠巖，珍珠巖的用量按胰臟原料重量15～20％的比例加入。