[發明專利]重組共表達維生素K環氧化物還原酶亞基1以提高依賴維生素K的蛋白質表達

無效

• 申請號: 201310245632.X
• 申請日: 2006-01-27
• 公開（公告）號: CN103396998A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 弗里德里?！ど骋练蛄指駹?/a>;恩斯特·伯姆
• 申請（專利權）人: 巴克斯特國際公司;巴克斯特保健股份有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/67;C07K14/745;A61K38/36;A61P7/04
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所 31210
• 代理人: 傅強國;賈師英

本申請是申請日為2006年1月27日、申請號為200680004712.4(PCT/EP2006/000734)的發明專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及一種宿主生物體，其含有編碼維生素K還原酶復合體亞基1(VKORC1)的重組核酸和編碼依賴于維生素K的(VKD)蛋白質的重組核酸，其中重組VKORC1和重組VKD蛋白質在所述宿主生物體中都得到表達。本發明還涉及一種包含細胞的細胞培養系統，該細胞含有所述重組核酸。本發明還涉及一種提高在宿主生物體中表達重組VKD蛋白質的生產率的方法，該宿主生物體在合適的體系中進行培養。

背景技術

維生素K環氧化物還原酶復合體(VKORC)重復利用還原形式的維生素K，該維生素K形式是依賴于維生素K的(VKD)蛋白質翻譯后γ-羧基化必需的輔助因子(Nelsestuen，G.L.，Zytkovicz，T.H.，&?Howard，J.B.(1974)The?mode?of?action?of?vitamin?K?Identification?of?gamma-carboxyglutamic?acid?as?a?component?ofprothrombin.J.Biol.Chem.，249，6347-6350)。最近，VKORC1基因得到了鑒定，并且被Rost等于2004年進行了詳細描述(Rost，S.，Fregin，A.，Ivaskevicius，V.，Conzelmann，E.，Hortnagel，K.，PeIz，H.J.，Lappegard，K.，Seifried，E.，Scharrer，I.，Tuddenham，E.G.，Muller，C.R.，Strom，T.M.，&Oldenburg，J.(2004)Mutations?in?VKORC1cause?warfarin?resistance?and?multiple?coagulation?factor?deficiency?type2.Nature，427，537-541)。

VKD蛋白質含有γ-羧基化谷氨酸(gla)殘基，該殘基表現出特異的生物化學和生理學特性，類似于依賴于Ca的結合凝血因子帶負電磷脂膜的特性(Mann，K.G.，Jenny，R.J.，&?Krishnaswamy，S.(1988)Cofactor?proteins?in?the?assembly?and?expression?of?blood?clotting?enzyme?complexes.Annu.Rev.Biochem.，57，915-956)。VKD蛋白質包括促凝血的因子II、VII和X，以及抗凝血的蛋白質C、S和Z。雖然限定為一種單獨的已知酶促反應，但在所有哺乳動物組織中都發現有γ-羧化酶活性(Vermeer，C.&?de?Boer-van?den?Berg?MA(1985)Vitamin?K-dependent?carboxylase.Haematologia(Budap)，18，71-97)。γ-羧化酶使用還原的維生素K作為輔助因子來催化羧基化反應。