[發(fā)明專利]具有高抗疲勞活性的梅魚魚鰾膠原蛋白的制備工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310243516.4
• 申請(qǐng)日: 2013-06-19
• 公開（公告）號(hào): CN103451258A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁國(guó)芳;吳飛紅;徐敏;張海龍;王立博;楊最素;李榮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江海洋學(xué)院
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務(wù)所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及海洋魚類膠原蛋白提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種具有高抗疲勞活性的梅魚魚鰾膠原蛋白的制備工藝。

背景技術(shù)

梅魚(Pseudosciaena?polyactis)屬于脊索動(dòng)物門硬骨魚綱鱸形目鱸總科，是溫水性近底層的小型經(jīng)濟(jì)魚類，產(chǎn)量較大，在我國(guó)近海尤其是舟山海域一帶均有出產(chǎn)。梅魚亦稱“梅大頭”、“梅頭”，形狀像黃魚而小，頭大，尾柄細(xì)，腹背和鰭都呈黃色。梅魚作為我國(guó)海洋捕撈的重要品種，其分布廣、產(chǎn)量高、價(jià)格便宜而為廣大漁民所知。梅魚加工后能獲得大量的魚鰾，現(xiàn)有處理方法常作為廢料處理，無法有效利用。

梅魚魚鰾內(nèi)富含有大量的生物大分子物質(zhì)膠原蛋白，它具有支撐器官和保護(hù)肌體的功能，也是組成細(xì)胞間質(zhì)的最重要功能蛋白質(zhì)。人體對(duì)膠原蛋白的吸收和利用能力強(qiáng)，它主要以水溶液的形式貯存于組織中，是人體補(bǔ)充和合成蛋白質(zhì)的原料，具有改善組織的營(yíng)養(yǎng)狀況和促進(jìn)機(jī)體新陳代謝的作用。現(xiàn)有研究中對(duì)膠原蛋白的注意力越來越多，但未見關(guān)于梅魚魚鰾膠原蛋白的相關(guān)報(bào)道。膠原蛋白的提取方法依據(jù)提取介質(zhì)的不同可分為5?類，即酸法、堿法、酶法、鹽法以及熱水浸提法等。把酶提法和其他提取方法相比，酶提法得率顯著高于酸提法（鄭淼.中國(guó)林蛙皮膚膠原蛋白的提取純化及性質(zhì)研究［J］.2008.6）。酶法提取膠原蛋白是利用蛋白酶將膠原迸行限制性降解，將末端肽切割下來，由于膠原肽鏈間的共價(jià)交聯(lián)鍵都是分子末端里的賴氨酸或羥賴氨酸的相互作用形成的，末端肽被切下來后。含三螺旋結(jié)構(gòu)的主體部分可溶于低濃度有機(jī)酸或中性溶液中被提取出來。

CN101234126A的發(fā)明公開了一種霞水母來源的具有抗疲勞活性的膠原蛋白活性肽及其制備工藝，將霞水母脫除鹽分，再熔融處理，最后經(jīng)均質(zhì)、脫色、脫鹽和干燥后獲得具有抗疲勞活性的膠原蛋白活性肽。該方法不適用于梅魚魚鰾膠原蛋白的制備。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種具有高抗疲勞活性的梅魚魚鰾膠原蛋白的制備工藝，工藝簡(jiǎn)單易行，膠原蛋白提取率高，能夠有效利用廢棄的梅魚魚鰾，提高了經(jīng)濟(jì)效益，制得的膠原蛋白常溫下可溶于蒸餾水，無異味，苦味，抗疲勞活性好，無明顯毒副作用。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：?

一種具有高抗疲勞活性的梅魚魚鰾膠原蛋白的制備工藝，包括如下步驟：

（1）梅魚魚鰾去除內(nèi)壁薄膜及血管，清水洗凈，接著將梅魚魚鰾除雜蛋白及脫脂。

（2）將步驟（1）處理得到的梅魚魚鰾按照1:30-40(m/v)的料液比加入pH?為1.9-2.1的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，再加入梅魚魚鰾重量1%-1.5%的胃蛋白酶，在4±0.5℃下酶解24-36h，加入終濃度為20±1mmol/L的EDTA滅酶，室溫離心15-20min，取上清液用活性炭除色素后，在4±0.5℃下離心30-40min，收集上清液，先于pH為3.5-4.0的的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中透析12±1h，再于pH為5.5-6.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中透析12±1h，最后于蒸餾水中透析至中性，得到梅魚魚鰾膠原蛋白A提取液。

（3）收集步驟（2）兩次離心產(chǎn)生的沉淀，將沉淀按照1:40-45(m/v)的料液比加入pH為8.4-8.6的磷酸氫二鈉-碳酸鹽緩沖液，加入沉淀重量1%-1.5%的復(fù)合酶，在4±0.5℃下酶解24-36h，加入終濃度為20±1mmol/L的EDTA滅酶，在4±0.5℃下離心30-40min，取上清液用活性炭除色素后，先于pH為7.9-8.0的磷酸氫二鈉-碳酸鹽緩沖液中透析12±1h，再于pH為7.5-7.7的磷酸氫二鈉-碳酸鹽緩沖液中透析12±1h，最后于蒸餾水中透析至中性，得到梅魚魚鰾膠原蛋白B提取液。

（4）合并梅魚魚鰾膠原蛋白A提取液和梅魚魚鰾膠原蛋白B提取液，4±0.5℃下離心15-20min，濃縮后冷凍干燥。

本發(fā)明采用海產(chǎn)品加工廢料—梅魚魚鰾作為提取原料，先將梅魚魚鰾除雜蛋白、脫脂，然后先用胃蛋白酶提取膠原蛋白，再將胃蛋白酶提取膠原蛋白后所得沉淀用復(fù)合酶提取膠原蛋白，合并提取到的膠原蛋白，離心干燥后得到具有高抗疲勞活性的梅魚魚鰾膠原蛋白。膠原蛋白提取率高，能夠有效利用廢棄的梅魚魚鰾，提高了經(jīng)濟(jì)效益，制得的膠原蛋白常溫下可溶于蒸餾水，無異味，苦味，抗疲勞活性好，無明顯毒副作用。