[發明專利]非小細胞肺癌預后檢測組合物及其應用

有效

• 申請號: 201310243137.5
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN103602678A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 潘世揚;王芳;徐建;楊瑞霞;黃珮珺;徐婷;張麗霞;陳丹;張燕;謝而付;顧兵;蔣葉
• 申請（專利權）人: 潘世揚
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，涉及一種非小細胞肺癌預后檢測組合物及其應用。

背景技術

肺癌是全世界最常見的惡性腫瘤，也是癌癥相關死亡的首位死因。每年確診的肺癌病例約161萬例，占惡性腫瘤的12.7%，肺癌相關死亡約138萬例，占癌癥相關死亡的18.2%。肺癌也是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率在中國大多數地區占第一位，在大城市及工業污染重的地區尤為顯著。隨著中國人口的持續增長和人口老齡化的加劇，加之生活方式、社會、經濟和環境等因素的改變，肺癌的發病率和死亡率呈明顯上升趨勢。

根據不同的肺癌細胞形態，可將肺癌分為兩大類，非小細胞肺癌（non-small?cell?lung?cancer，NSCLC）和小細胞肺癌（small?cell?lung?cancer，SCLC），非小細胞肺癌占所有肺癌病例的80%～85%，由于大多數患者在患病早期沒有明顯的癥狀，確診時多已進人中晚期階段，治療效果及預后較差。缺乏有效的早期診斷方法和晚期肺癌治療效果不佳是導致肺癌患者預后不良的主要原因。既往肺癌早期診斷常用的方法是影像學檢查、血清標志物或者痰液細胞學檢查。但敏感性和特異性均低；以被修飾的細胞為目標的靶向治療則需要知道精確的癌細胞分類，但這僅依靠常規的組織病理學診斷技術是遠遠不夠的。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一類新發現的非編碼單鏈小分子RNA，通常是由RNA聚合酶II轉錄。成熟的微小RNA保留在具有功能的復合體中，通過與靶mRNA的3’非翻譯區結合(3untranslated?region，3一UTR)結合，抑制mRNA的翻譯或影響mRNA的穩定性而發揮作用。廣泛參與機體的生長發育、細胞的代謝、增殖、分化、凋亡和腫瘤形成等生理和病理過程，已成為生命科學界研究的熱點。新近研究發現，微小RNA在人類的多種疾病中，包括腫瘤的病理過程中發揮重要作用。微小RNA表達與多種癌癥相關，微小RNA可以起“癌基因”或者“抑癌基因”的功能，大約50％已闡明的微RNA在基因組上定位于與腫瘤相關的脆性位點(fragile?site)。這說明微小RNA在腫瘤發生、發展過程中起了至關重要的作用。

miRNA的表達具有時空特異性。在不同組織與不同發育階段中miRNA的水平有顯著差異，miRNA在不同腫瘤中具有特定的表達模式，這為腫瘤的基因診斷提供了一種新方法。由于肺癌的發生受環境、遺傳等多因素影響，其中miRNA在肺癌的早期診斷和治療中發揮著重要的作用。

越來越多的研究證明，血清miRNA的表達譜在預測肺癌的發展和預后中具有重要價值。Raponi?M^[1]檢測了61例肺鱗癌患者以及與之匹配的正常肺組織樣本，發現有15種miRNAs存在表達差異，包括著名的miR‐17‐92簇。目前，miR‐155、let‐7和miR‐146b被證明在肺腺癌中具有較高的預后判斷價值，特別是miR‐146b對預后的指示準確率可達到78％。Cao?W^[2]研究證明，miR‐21、miR‐143以及miR‐181a可作為NSCLC分子診斷及預測預后的生物標記物。Yanaihara等^[3]運用RT‐PCR及Kaplan‐Meier分析顯示：has‐mir‐155前體高表達或者has‐mir‐let‐7a‐2前體低表達的肺腺癌患者預后差。另外，slva等^[4]采用芯片技術檢測發現，血清miR‐30‐3P和let‐7f的水平與肺癌患者的無病生存率和總生存率顯著相關；血清miR‐30‐3P和let‐7f的高水平表達提示肺癌患者預后不良。但是，到目前為止，尚缺少對化療或放療前后肺癌患者血液中的miRNA改變的檢測研究數據，以及尚未有詳細的關于用于療效評估的有關理想miRNA及其組合的報道，從而可以將miRNA檢測用于肺癌患者的個體化治療。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的上述不足，提供非小細胞肺癌預后檢測組合物。

本發明的另一目的是提供所述組合物的應用。

本發明的目的可通過如下技術方案實現：

一種人體血清/血漿中穩定存在的非小細胞肺癌預后標志miRNA組合，由miR‐638和miR‐27a組成。

檢測所述的非小細胞肺癌預后標志miRNA組合的引物和探針組合物，由美國應用生物系統公司生產的貨號為ABI?assay?ID000200的miR‐638引物和熒光探針和美國應用生物系統公司生產的貨號為ABI?assay?ID001582的miR‐27a引物和熒光探針組成。