[發明專利]抗藍舌病病毒血清8型VP2蛋白的單克隆抗體BTV8-VP2-3E11及其識別的B細胞表位多肽和應用

無效

• 申請號: 201310241663.8
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN103305470A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 吳東來;徐青元;劉霓紅;楊濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;C07K7/08;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/14;G01N33/68
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

技術領域

本發明涉及一株雜交瘤細胞株及其分泌的單克隆抗體，尤其涉及一株分泌抗BTV8-VP2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其所分泌的單克隆抗體；本發明還涉及一個B細胞表位多肽，尤其涉及由上述單克隆抗體所識別的BTV8-VP2蛋白B細胞表位多肽；本發明還涉及上述雜交瘤細胞株、單克隆抗體以及B細胞表位多肽在制備診斷、檢測或預防BTV8藥物中的應用，屬于BTV8的防治領域。?

背景技術

藍舌病(Bluetongue，BT)是由呼腸孤病毒科環狀病毒屬的藍舌病病毒(Bluetongue?virus，BTV)引起的反芻動物蟲媒傳染病。BTV能感染大多數家養的和野生的反芻動物，因動物的易感性不同表現出不同的臨床癥狀。不同流行地區易感動物的死亡率差別很大，一般都可達到30%，在某些地區甚至更高。由于BT對世界經濟的影響，世界動物衛生組織(OIE)將BT列為法定通報性疾病，我國將其劃定為一類動物疫病。BT所造成的相關經濟損失一方面是直接降低動物的生產能力和增加動物的死亡率，另一方面，也是更重要的一方面，是由于控制動物的流動、控制牛精液出口以及實施這些控制措施所需的費用而間接造成的動物貿易損失。?

BT最早于1876年發現于南非的綿羊，1902年被命名為“抗瘧疾綿羊卡他熱”，1905年被正式命名為“藍舌病”。20世紀初，由于高度易感的非本土綿羊品種的引進致使BT開始在非洲蔓延。BT被認為是一種地方流行性疾病，位于緯度40°S和53°N的美洲、非洲、亞洲、澳洲是高發地區，僅1996年造成全球范圍內的經濟損失高達30億美元。1979年我國首次在云南綿羊發現藍舌病，隨后在29個省均檢出BT陽性家畜，如山西（1991）、甘肅（1990）、四川（1988）、安徽（1985）、湖北（1983）等。BT主要通過媒介昆蟲庫蠓叮咬傳播，病畜與健康家畜接觸不傳染，具有非接觸傳播的特點。2006年以來，隨著氣候變暖，BT尤其是BTV8在歐洲許多國家如比利時、荷蘭、法國、德國等爆發，造成了嚴重的經濟損失，同時也擴大了BTV的傳統分布范圍。覃紹敏等(2011)對廣西11個地區的山羊BT進行了血清學調查，結果表明?陽性率為6.3%-45.1%，平均陽性率為20.5%。這表明BT對我國的反芻動物具有潛在的威脅性。?

BTV血清型眾多，目前已發現24個血清型，而隨著氣候變化新的血清型不斷出現，如最近又相繼分離到的BTV25（瑞士，2008年）和BTV26（科威特，2011年）。然而由于各個血清型之間交叉免疫保護性差，使得疫苗免疫錯綜復雜不能起到很好的保護作用，到目前為止尚未有有效的疫苗出現。早期診斷，早期預防，是防止本病爆發的最有效方法。所以，必須加強我國BT尤其是BTV8的相關工作的研究，做好必要的技術儲備。?

BTV屬于呼腸孤病毒科（Reoviridae）環狀病毒屬（Orbivirus），其基因組為分節段的線性雙鏈RNA，包含10個節段，大小約為19kb，共編碼11種蛋白。BTV病毒粒子有三層衣殼蛋白組成，由L2基因編碼的VP2是BTV外殼蛋白的主要成分之一。VP2為血清型特異性抗原，能刺激中和抗體產生，也是病毒血凝素抗原。BTV8-VP2長961個氨基酸，不同BTV血清型之間VP2序列差異最大。將BTV的24個血清型標準株的L2基因序列進行系統發育樹比較，發現編碼VP2的L2基因序列的變異與BTV血清型之間有密切聯系。這表明VP2在決定BTV血清型方面起重要作用，是建立BTV血清型鑒別診斷的理想抗原。所以，篩選出一株可以分泌抗BTV8-VP2蛋白特異性抗體的雜交瘤細胞株，并鑒定出其所分泌的單克隆抗體所識別的BTV8-VP2蛋白特異性B細胞表位多肽對BTV8的診斷、預防具有重要作用，并為BTV8亞單位疫苗的研制奠定了基礎。?

發明內容

本發明目的之一是提供一株分泌BTV8-VP2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株；?

本發明目的之二是提供一種由上述雜交瘤細胞株所分泌的單克隆抗體，該單克隆抗體可與BTV8-VP2蛋白發生特異性反應，而與其他血清型VP2蛋白不反應；?

本發明目的之三是鑒定一個BTV8-VP2蛋白的特異性B細胞表位多肽。?

本發明上述目的是通過以下技術方案來實現的：?