[發明專利]鉤端螺旋體快速質譜檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310241394.5
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN103344695A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發明（設計）人: 肖迪;張翠彩;張建中;蔣秀高;張慧芳;李秀文
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

1.一種用于鉤端螺旋體（Leptospira）檢測的特征蛋白質譜模型，其特征在于，含有以下兩組鉤端螺旋體特征蛋白，

1）23個特征蛋白，其質荷比m/z分別為：3209.1，3715.6，4279.9，5262.6，5656.5，5777.5，5802.8，6008.7，6189.0，6215.6，6280.5，6350.9，6994.4，7066.1，7432.1，8057.9，8252.7，8734.3，9909.4，10100.5，10274.9，10520.73，11307.9；

2）19個特征蛋白，其質荷比m/z分別為：4389.3，5442.3，5690.3，5731.6，6003.5，6203.8，6392.6，6697.9，7192.2，7224.1，7289.5，7321.9，7368.7，7390.7，8088.1，8417.6，9571.3，11830.0，11876.3。

2.檢測鉤端螺旋體特征蛋白的質譜模型在制備鉤端螺旋體檢測試劑盒中的應用，其特征在于，所述質譜模型含有以下兩組鉤端螺旋體特征蛋白，

1）23個特征蛋白，其質荷比m/z分別為：3209.1，3715.6，4279.9，5262.6，5656.5，5777.5，5802.8，6008.7，6189.0，6215.6，6280.5，6350.9，6994.4，7066.1，7432.1，8057.9，8252.7，8734.3，9909.4，10100.5，10274.9，10520.73，11307.9；

2）19個特征蛋白，其質荷比m/z分別為：4389.3，5442.3，5690.3，5731.6，6003.5，6203.8，6392.6，6697.9，7192.2，7224.1，7289.5，7321.9，7368.7，7390.7，8088.1，8417.6，9571.3，11830.0，11876.3。

3.一種用于檢測鉤端螺旋體特征蛋白質譜模型的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）制備鉤端螺旋體蛋白樣品：收集液體培養至對數生長期的鉤端螺旋體菌株，離心，棄上清；將沉淀用菌體洗滌液A洗滌，離心，棄上清；沉淀菌體用菌體洗滌液B和C混合后洗滌，高速離心，棄上清洗滌液；將沉淀菌體加入蛋白提取液A和B進行抽提，高速離心，取上清；

2）將上述待檢鉤端螺旋體蛋白樣品分別上質譜儀樣品靶，采集2000-20000Da范圍內的肽圖譜；設定參數，對蛋白質指紋圖譜進行標準化處理；

3）對所得數據進行統計學處理，得到具有統計學意義的鉤端螺旋體特征蛋白，其中，致病性鉤端螺旋體特征蛋白其質荷比分別為：3209.1，3715.6，4279.9，5262.6，5656.5，5777.5，5802.8，6008.7，6189.0，6215.6，6280.5，6350.9，6994.4，7066.1，7432.1，8057.9，8252.7，8734.3，9909.4，10100.5，10274.9，10520.73，11307.9；

將上述23個特征蛋白作為檢測致病性鉤端螺旋體的質譜模型；

其中，非致病性鉤端螺旋體特征蛋白質荷比為：4389.3，5442.3，5690.3，5731.6，6003.5，6203.8，6392.6，6697.9，7192.2，7224.1，7289.5，7321.9，7368.7，7390.7，8088.1，8417.6，9571.3，11830.0，11876.3；

將上述19個特征蛋白作為檢測非致病性鉤端螺旋體的質譜模型；

其中，步驟1）所述菌體洗滌液A配方為磷酸二氫鉀0.2g，磷酸氫二鈉2.9g，氯化鈉8.0g，氯化鉀0.2g，吐溫-200.5mL，加水至1000mL，使用鹽酸調節pH值為7.4，高壓滅菌；所述菌體洗滌液B為18.2兆歐超純水，所述菌體洗滌液C為100%色譜級乙醇；所述蛋白提取液A為70%色譜級甲酸，所述蛋白提取液B為色譜級乙腈。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟1）中所述的離心，其參數為12000g，5min；所述的高速離心，其參數為16000g，2min。