[發明專利]一種免疫蛋白Akirin2及其基因和應用

有效

• 申請號: 201310240620.8
• 申請日: 2013-06-17
• 公開（公告）號: CN103333243A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 詹志春;張菁
• 申請（專利權）人: 武漢新華揚生物股份有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;C12N15/63;C12N15/85;A23K1/16;A23K1/18
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體地，本發明涉及一種天然免疫蛋白Akirin2及其基因和應用。

背景技術

天然免疫系統存在于所有多細胞動物中，尤其在低等多細胞動物中發揮重要作用（Akira?S,Uematsu?S,Takeuchi?O.Pathogen?Recognition?and?Innate?Immunity.Cell.2006124:783-801）。近幾年，隨著對免疫機制研究的深入，對天然免疫系統的研究越來越受到廣泛關注。在2007年Goto等通過對果蠅細胞進行功能性全基因組的RNAi篩選,獲得了一種天然免疫蛋白新成員Akirin。Akirin作為一種新型的天然免疫蛋白，在機體的免疫調控中發揮重要作用。

Akirin蛋白家族是一個結構保守、快速進化的蛋白家族，它參與了細胞內蛋白質質量控制，細胞增殖、分化、凋亡，細胞對病毒的防御及機體免疫應答等重要的生命過程。其缺失或突變將導致異常的免疫應答反應，如自身免疫病、惡性腫瘤及炎癥反應等。目前，所研究的Akirin蛋白，其N-端和C-端及其保守，中間由一段低保守的序列相連，而且在氨基端存在細胞核定位信號，大多數物種還存在第二個細胞核定位信號，Akirin蛋白主要在細胞核中發揮其作用，結構上的保守預示著Akirin蛋白家族可能以相同的作用機制參與各種生命活動過程。

目前研究發現Akirin蛋白主要參與調節細胞增殖與分化，細胞的減數分裂，胚胎發育，免疫調控等途徑相關。而對于Akirin蛋白的研究主要集中于模式生物中，研究發現Akirin基因的缺失將會導致小鼠、果蠅和蜱胚胎的死亡（Goto?A,Matsushita?K,et?al..Nat?Immunol.20089:97-104；de?la?Fuente?J,Maritz-Olivier?C,et?al.BMC?Genomics.20089:372.）。研究發現Akirin也參與到了小鼠和果蠅的TLR、Toll以及Imd免疫通道中，通過中間介質與NF-κB、REL結合調控免疫因子及抗菌肽的表達，最近也發現了Akirin在節肢動物生命活動當中發揮的重要作用，作為其自身保護性蛋白，已被用做抗原來免疫寄主細胞，從而提高寄主的免疫力抵抗節肢動物如蜱、紅螨等的寄生，更重要的是Akirin已發展成為了疫苗，可抗多種寄生蟲的寄生。同時研究發現，在線蟲中發現了在Akirin基因突變的情況下將導致在減數分裂I期的前期同源染色體將無法正常聯會。而魚類Akirin基因的研究起始于2010年一篇有關在大西洋鮭魚中發現了八種Akirin蛋白，文章揭示了在鮭魚中Akirin家族在肌發生過程中發揮多樣性的功能，而對于Akirin蛋白的免疫功能并無深入研究。近些年來，隨著養殖環境的惡化、養殖密度的增大，魚類病害不斷發生，造成了巨大的經濟損失，Akirin在水產養殖業上的應用也是后續要解決的問題。泥鰍作為一種鯉形目的淡水魚是一種新型且具有代表性的研究對象，為開發具有免疫活性的Akirin蛋白制劑且投入于水產飼料、漁藥等行業的應用提供了基礎。Akirin雖然具有免疫活性，但是其表達量還是較低的，要想得到大范圍的應用，通過基因工程的方法得到具有生物學活性的Akirin也是目前需要解決的一大問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種免疫蛋白Akirin2。

本發明的再一目的是提供編碼上述Akirin2的基因akirin2。

本發明的再一目的是提供包含上述Akirin2基因的重組載體。

本發明的再一目的是提供包含上述Akirin2基因的重組質粒。

本發明的再一目的是提供一種制備Akirin2的方法。

本發明首先所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種性質優良的新免疫蛋白Akirin2。本發明的發明人從泥鰍（Paramisgurnus?dabryanus）中得到一個新的具有參與機體抗革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌活性的Akirin2。適合于水產飼料、漁藥等行業中使用。

從泥鰍中獲得了一種免疫蛋白Akirin2，該蛋白含有184個氨基酸和一個終止密碼子，前端22-27位點和75-77位點氨基酸殘基為細胞核定位信號序列。其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示：

??1M?A?C?G?A?T?L?K?R?T?M?D?F?D?P?L?M

?18N?P?A?S?P?K?R?R?R?C?A?P?M?S?P?S?S?S?S?S

?38S?P?Q?K?Y?L?R?M?E?P?S?P?F?G?T?V?S?S?V?L