[發(fā)明專利]一種從瓜蔞皮中分離純化4種核苷類化學(xué)成分的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310240349.8
• 申請(qǐng)日: 2013-06-18
• 公開（公告）號(hào): CN103304613A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李愛峰;孫愛玲;柳仁民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 聊城大學(xué)
• 主分類號(hào): C07H19/16
• 分類號(hào): C07H19/16;C07H19/167;C07H1/08
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，具體是涉及一種從中藥瓜蔞皮中分離純化4種核苷類化學(xué)成分（腺嘌呤、鳥嘌呤核苷、6-異次黃嘌呤核苷及腺嘌呤核苷）的方法。

背景技術(shù)

瓜蔞皮為葫蘆科栝樓屬植物栝樓（Trichosanthes?kirilowii?Marim.）或雙邊栝樓（Trichosanthes?rosthornii?Harms.）的干燥成熟果皮，屬于常用中藥，具有潤肺化痰、利氣寬胸等功效，臨床上廣泛用于治療痰熱咳嗽、痰濁黃稠、咽痛、胸痛、吐血、衄血、便秘、癰瘡腫毒等癥。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)踐表明瓜蔞皮具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量、提高心肌耐缺氧能力、降低血清膽固醇、抗菌、抗癌等多種藥理作用，尤其是對(duì)心血管疾病具有很好的治療作用。

核苷類成分是生物細(xì)胞維持生命的重要物質(zhì)，參與DNA代謝過程，具有基因治療、改善腦細(xì)胞代謝、免疫調(diào)節(jié)、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、抗病毒、抗癌等多種藥理作用。重點(diǎn)核苷類成分已作為藥品、保健品和食品添加劑服務(wù)于人類健康。腺苷是廣泛存在于一些滋補(bǔ)藥品如冬蟲夏草、靈芝、貝母等中的重要成分，藥用作用顯著，具有抗凝血、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、松弛支氣管平滑肌、鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)、抗心律不齊、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用。

現(xiàn)已有文獻(xiàn)報(bào)道從瓜蔞皮中提取純化核苷類化學(xué)成分的方法。滕勇榮[瓜蔞皮和瓜蔞皮注射液化學(xué)成分研究，山東中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文，2011年]利用反復(fù)硅膠柱層析、大孔吸附樹脂柱色譜及制備型高效液相色譜等分離手段對(duì)瓜蔞皮的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，共得到7個(gè)化合物，其中包括3個(gè)核苷類成分（腺嘌呤、鳥嘌呤核苷及6-異次黃嘌呤核苷）。時(shí)巖鵬[栝樓化學(xué)成分的研究及其α-菠菜甾醇的含量測(cè)定（I），中草藥，2002年1期]利用反復(fù)硅膠柱層析對(duì)栝樓的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，自石油醚部位、氯仿部位、正丁醇部位分離得到12個(gè)化合物，其中10個(gè)得到了鑒定，包括1種核苷類成分—尿嘧啶。劉岱琳[瓜蔞的抗血小板聚集活性成分研究.?中草藥，2004年12期]利用抗血小板聚集的活性追蹤方法，采用Sephadex?LH-20柱色譜及反復(fù)硅膠柱色譜分離，自瓜蔞中分離得到7個(gè)化合物，其中包括1種核苷類成分—腺嘌呤核苷。

上述方法主要存在的問題是：分離過程步驟較為繁瑣，有時(shí)需要使用氯仿為萃取劑或洗脫劑，對(duì)人體和環(huán)境均有嚴(yán)重危害，而且得到的核苷類物質(zhì)的種類少，生產(chǎn)周期較長，生產(chǎn)成本較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡(jiǎn)便、綠色環(huán)保、綜合成本低、生產(chǎn)周期短的快速從中藥瓜蔞皮中分離純化核苷類化學(xué)成分的方法。

本發(fā)明的方案如下：

從中藥瓜蔞皮中分離純化核苷類化學(xué)成分的方法，步驟為：

（1）瓜蔞皮粗提物的制備：取粉碎好的瓜蔞皮藥材，用水加熱回流提取，提取液經(jīng)減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2左右，向濃縮液中加入95%乙醇至乙醇的濃度達(dá)70%左右，靜置72?h，過濾，取上層清液，減壓濃縮得粗提物；

（2）大孔吸附樹脂柱粗分離：將瓜蔞皮粗提物溶于水中，上HPD826型大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用水進(jìn)行洗脫，再用濃度為10%左右的乙醇-水溶液進(jìn)行洗脫，最后用濃度為30%左右的乙醇-水溶液進(jìn)行洗脫，分別收集10%及30%左右的乙醇-水洗脫液，前者減壓濃縮，得樣品1，后者減壓濃縮，得樣品2；

（3）樣品1的進(jìn)一步分離純化：將樣品1用半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜柱為YMC?ODS-AQ柱，流動(dòng)相為甲醇-水，檢測(cè)波長為254?nm；?

（4）樣品2的進(jìn)一步分離純化：將樣品2用半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜柱為YMC?ODS-AQ柱，流動(dòng)相為甲醇-水，檢測(cè)波長為254?nm；

收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。

前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1）加熱回流提取時(shí)提取時(shí)間為1-3小時(shí)，更優(yōu)選提取時(shí)間為1.5-2.5小時(shí)（優(yōu)選2小時(shí)）。

前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（1）提取次數(shù)為2-6次，更優(yōu)選提取次數(shù)為3-5次（優(yōu)選4次）。

前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟（3）流動(dòng)相為3%-7%的甲醇-水洗脫液，優(yōu)先選用洗脫方式為7%甲醇-水等度洗脫/5%甲醇-水等度洗脫/3%甲醇-水等度洗脫/甲醇-水梯度洗脫，控制洗脫液流速為2.5-4.5?mL/min（優(yōu)選3.5?mL/min）。