[發明專利]基于RAFT策略蛋白質表面分子印跡材料及制備和應用

有效

• 申請號: 201310240303.6
• 申請日: 2013-06-14
• 公開（公告）號: CN104231143A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 張麗華;李沁然;楊開廣;梁玉;江波;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C08F220/06
• 分類號: C08F220/06;C08F220/28;C08F222/38;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/30
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.基于RAFT策略蛋白質表面分子印跡材料，其特征在于：以修飾了雙硫酯官能團的硅膠顆粒為基質，溶菌酶作為模板蛋白，以MAA和HEMA為單體，MBA作為交聯劑，磷酸鹽水溶液作為溶劑，采用氧化還原引發聚合反應的方式進行聚合反應；聚合完成后，將聚合物當中的模板蛋白洗脫，并將材料表面的雙硫酯官能團還原為巰基，即可得到對溶菌酶分子有特異性識別能力的分子印跡核殼結構親水性微球。

2.一種權利要求1所述蛋白質表面分子印跡材料的制備方法，其特征在于：

1）硅膠基質顆粒表面需要先修飾上雙硫酯官能團；

2）溶菌酶于硅膠基質顆粒上的固載；

3）聚合反應：以MAA和HEMA為單體，MBA作為交聯劑，磷酸鹽水溶液作為溶劑，采用氧化還原引發聚合反應的方式進行聚合反應；

4）模板洗脫：聚合完成后，需要將聚合物表面未反應的聚合溶液洗凈，之后將形成聚合物當中的模板蛋白進行洗脫；

5）在聚合反應和模板洗脫完成后，將材料表面的雙硫酯官能團還原為巰基。

3.按照權利要求2所述的制備方法，其特征在于：

硅膠基質顆粒表面需要先修飾上雙硫酯官能團的過程為；首先在硅膠顆粒表面通過氨丙基三乙氧基硅烷的硅烷化反應在硅膠表面修飾氨基，然后通過在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)的酯化反應，將可逆加成-活性鏈轉移試劑（RAFT試劑）共價修飾到硅球基質的表面。

4.按照權利要求3所述的制備方法，其特征在于：

在硅烷化修飾環節，硅膠顆粒與分散劑甲醇的質量比為1:5-1:10，硅烷化試劑與分散劑甲醇的體積比為1:20-1:40；在酯化反應中，EDC和NHS的摩爾比為1:0.8-1:1.2，加入NHS和RAFT試劑的摩爾比為1:0.8-1:1.2，反應溫度為18-25℃，反應時間為12-24小時。

5.按照權利要求2所述的制備方法，其特征在于：

溶菌酶于硅膠基質顆粒上的固載過程：溶菌酶溶于溶菌酶磷酸鹽溶液中，蛋白濃度為0.8mg/mL-1.2mg/mL；硅膠顆粒置于聚合溶液中，修飾RAFT試劑的硅膠在溶菌酶磷酸鹽溶液當中的靜態吸附時間為0.5-1.5小時。

6.按照權利要求2所述的制備方法，其特征在于：

聚合過程：MAA和HEMA的質量比為1:9-9:1，加入單體總和與交聯劑MBA的質量比為50:1-5:1；磷酸鹽水溶液為聚合反應所用溶劑，單體和交聯劑的質量占聚合溶液總質量的10%-25%；加入氧化還原引發劑亞硫酸氫鈉和過二硫酸銨(APS)的質量分別占聚合溶液總質量的0.2%-0.4%；聚合溫度為35-45℃，聚合時間為20-25小時。

7.按照權利要求2所述的制備方法，其特征在于：

模板洗脫過程：聚合完成后用水洗滌形成的聚合物，每次使用1-5mL水/20mg材料，洗滌2-4次；

模板洗脫劑由水、乙腈、甲酸組分組成，其中甲酸比例為15%-25%（v/v），乙腈比例為30%-50%（v/v），余量為水，處理溫度為18-25℃，處理時間為3-10分鐘；洗脫完成后，用水洗去多余的模板洗脫劑，每次使用1-5mL水/20mg材料，洗滌2-4次。

8.按照權利要求2所述的制備方法，其特征在于：使用有機胺的乙醇溶液作為雙硫酯官能團的還原劑，將雙硫酯官能團還原成巰基；有機胺的乙醇溶液當中有機胺組分的比例為5%-15%（v/v），有機胺的乙醇溶液與待處理聚合物材料的質量比為40:1-60:1，處理溫度為18-25℃，處理時間為6-18小時；處理完畢后依次分別用乙醇和水洗去多余的雙硫酯還原劑，每次使用1-5mL水或乙醇/20mg材料，洗滌2-4次。

9.一種權利要求1所述的蛋白質分子表面印跡材料在蛋白選擇性識別中的應用，其特征在于：其為基于可逆加成-活性鏈轉移策略實現蛋白質分子表面印跡材料，可用于生物樣品中高選擇性識別和分離目標蛋白。