[發明專利]一種制備專一性T細胞的配方、方法及其配方制備方法

有效

• 申請號: 201310240262.0
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN103525762A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 李建謀
• 申請（專利權）人: 富禾生醫股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 翟國明

技術領域

本發明涉及制備專一性T細胞的配方、方法及配方制備方法，尤其涉及一種利用呈現專一性抗原的樹突狀殺手細胞群活化T細胞，制備專一性T細胞的配方、方法及配方制備方法。

背景技術

人體對外來異物具有辨識和啟動一連串反應的防御機轉，這防御系統就是免疫系統。免疫系統擁有不同作用的白血球及淋巴細胞、不同功能的蛋白質因子，如免疫球蛋白、介白質及細胞激素等，互相協調合作，形成人體的防御力。免疫反應依其特異性及記憶性的有無，分為先天性及后天性。先天性免疫系統包括可溶性化學因子、干擾素、補體系統、嗜中性淋巴球及巨噬細胞的吞噬作用和自然殺手細胞的毒殺作用等。后天性免疫系統包括體液免疫及細胞免疫，前者包括抗體生成系統，后者包括淋巴細胞、淋巴激素及免疫記憶系統。記憶的功能使免疫系統對已對付過的抗原，引發強而快速的次發反應，可將外來危害因子有效去除。

免疫反應對抗原會有不同反應是由于主要組織兼容復合物（Major?Histocompatibility?Complex,MHC）的作用。外來抗原通常需要經過細胞處理與MHC分子結合后，才能被免疫系統所認知。因此MHC的類型與個人對特定因子的免疫力有關，是造成個體對疾病易感性的重要因素。人類的MHC又名人類白血球抗原（Human?Leukocyte?Antigen,HLA）。HLA可分為class?I、class?II，為結構相似的醣蛋白，與抗原呈現功能有關。HLA?class?I抗原表現于所有體細胞上，而class?II只表現于巨噬細胞、B細胞及樹突狀細胞（Dendritic?Cell,DC）的細胞表面上。

人體內有一種高度分化的免疫細胞，叫做抗原呈現細胞（Antigen?Presenting?Cells,APC）。抗原呈現細胞的功能是攝取、加工、處理外源性抗原并將加工后抗原呈現給T淋巴細胞，誘導T淋巴細胞進行增殖進而分化成效應細胞，產生免疫反應，以辨識并抵抗感染甚至癌癥細胞。樹突細胞（Dendritic?cells，DCs）是目前所知的人體內功能最強大的抗原呈現細胞，因其成熟時伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。DC的最大特點是能夠顯著刺激初始T細胞進行增殖，而其他的抗原呈現細胞，如巨噬細胞、B細胞僅能刺激已活化的或記憶性T細胞。因此DC是機體免疫反應的始動者，在免疫反應的誘導中具有獨特的地位。

另外，自然殺手細胞（Natural?Killer?cell,NK?cell）也是一種在免疫反應中占有重要地位的細胞，其起源于淋巴前驅細胞，占人類血液中淋巴球的5～10％。NK細胞表面缺乏專一性的抗原受體，負責非專一性防御，可以胞殺腫瘤細胞和被病毒感染細胞。NK細胞表面雖然沒有抗原專一性受體，但其表面有許多其他的膜蛋白接受來自目標細胞的刺激，以調節NK細胞的活性，這些膜蛋白大致可分為“抑制性受體”和“活化性受體”。當NK細胞與細胞接觸后，獲得活化性受體的訊息，若與正常細胞接觸，則正常細胞表面的第一型MHC分子與抑制性受體結合，傳遞了“抑制”NK細胞活性的訊息，故NK細胞不會被活化，以避免殺死正常細胞。若正常細胞被病毒感染或轉為腫瘤細胞后，第一型MHC分子的表現常會發生異常，因此當NK細胞接觸不正常細胞時，便無法獲得抑制性受體的訊息，于是NK細胞便活化進行胞殺作用。也就是說，只有“活化”訊息存在，且“抑制”的訊息異常或不存在時，NK細胞才會進行胞殺作用。

近年來，同時具有上述兩種DC與NK細胞功能的干擾素分泌型殺手樹突細胞逐漸受到關注。干擾素分泌型殺手樹突細胞可以從毒殺目標、抗原呈現到活化T細胞都由自己完成，也即干擾素分泌型殺手樹突細胞找到目標后會毒殺目標，接著把碎片吞噬后呈現抗原給T細胞，并活化T細胞。然而，正如同前文述及，干擾素分泌型殺手樹突細胞雖然在免疫反應中扮演了相當重要的角色，但因為干擾素分泌型殺手樹突細胞在體內的量非常稀少，如此低的細胞比率及數目，需要繁瑣的步驟來加以純化，也限制了針對干擾素分泌型殺手樹突細胞的進一步研究。不僅如此，目前的技術僅能從老鼠的脾臟、淋巴結或骨髓中分離出干擾素分泌型殺手樹突細胞，使得要實際將其應用于研究或臨床上都面臨了不小的瓶頸。

因此，發明人經過長年的努力以及無數次的試驗，已成功篩選出了人類體內同時具有毒殺及抗原呈現功能的細胞，并定義該細胞為樹突狀殺手細胞（Dendritic?Killer?Cell,DKC），又稱為毒殺型樹突細胞(cytoDC)或干擾素分泌型殺手樹突細胞(IKDC)。