[發(fā)明專利]一種用于弓形蟲感染預(yù)防的基因及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310240113.4
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN103333900A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳佳;朱興全;徐民俊;黃思揚(yáng);李中原;宋慧
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N15/24
• 分類號: C12N15/24;C12N15/57;C12N15/63;C12N9/64;C07K14/54;A61K48/00;A61K39/39;A61P33/02
• 代理公司: 北京中恒高博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 高松

1.一種用于弓形蟲感染預(yù)防的核苷酸序列，其含有選自以下的核苷酸序列：

1）SEQ?ID?No.3中所示的第724-第1470位核苷酸序列；和/或

SEQ?ID?No.1中所示的第724-第2472位核苷酸序列；

2）與1）中所示的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列；

3）對上述1）或2）所示核苷酸序列進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)堿基的取代、缺失、添加修飾的核苷酸序列。

2.一種載體，其包括權(quán)利要求1所述的核苷酸序列，例如所述載體為pVAX1載體。

3.重組質(zhì)粒，其為SEQ?ID?No.1中所示的核苷酸序列；和/或

SEQ?ID?No.3中所示的核苷酸序列。

4.一種蛋白，其氨基酸序列由權(quán)利要求3所述的重組質(zhì)粒編碼。

5.一種疫苗，其包括權(quán)利要求1所述的核苷酸序列，以及醫(yī)學(xué)上可接受的載體。

6.權(quán)利要求1所述的核苷酸序列、權(quán)利要求2所述的載體、權(quán)利要求3所述的重組質(zhì)粒、權(quán)利要求4所述的蛋白、權(quán)利要求5所述的疫苗在弓形蟲感染預(yù)防中的應(yīng)用。

7.大量制備pVAX1，pVAX-IL21-IL15和pVAX-CDPK1重組質(zhì)粒的方法，步驟如下：

（1）、將含有pVAX1，pVAX-IL21-IL15和pVAX-CDPK1質(zhì)粒的菌液在Kan⁺?LB固體選擇培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)，接種到Kan⁺?LB液體選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；

（2）、將步驟（1）得到的細(xì)菌培養(yǎng)物離心取沉淀，重懸菌體；

（3）、將步驟（2）得到的菌液先后用Solution?II和Solution?III混勻，離心取上清；

（4）、將步驟（3）得到的上清用0.6倍體積±1ml的異丙醇混勻，離心取沉淀，將沉淀先用ddH₂O溶解，再加入LiCl溶液混勻，離心取上清，加入異丙醇混勻后離心棄上清，控干，得白色沉淀物；

（5）、將步驟（4）制備的白色沉淀物除RNA，加入無水乙醇和NaAc溶液混勻后離心取沉淀，洗脫沉淀。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：步驟（2）后不包含加入溶菌酶溶液振蕩混勻的步驟。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：步驟（3）中Solution?II和Solution?III加入的時(shí)間間隔控制在5min以內(nèi)。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：步驟（5）中離心取沉淀的方法為將上清吸出，再倒置于濾紙上控干。