[發明專利]一種測定外生菌根真菌影響土壤膠體表面特征與組成的方法

無效

• 申請號: 201310239703.5
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN103383335A
• 公開（公告）日: 2013-11-06
• 發明（設計）人: 王文杰;李艷紅;王瓊;祖元剛;王慧梅;任潔;仲召亮;裴忠雪
• 申請（專利權）人: 東北林業大學;王文杰
• 主分類號: G01N15/02
• 分類號: G01N15/02;G01Q60/24;G01N23/22;G01N23/20;G01N21/25
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1.一種測定外生菌根真菌影響土壤膠體表面特征與組成的方法，具體特征在于：1）制備真菌菌液；2）提取土壤膠體；3）然后使土壤膠體與真菌菌液反應，制備不同樣品；4）激光粒度儀主要觀察土壤膠體粒徑大小及分布的變化；5）原子力顯微鏡和掃描電鏡觀察土壤膠體表面特征的變化；6）X射線衍射辨認土壤的礦物組成，并分析各礦物質晶粒尺寸和相對結晶度的變化；7）紅外光譜觀測土壤各官能團的變化；8）X射線光電子能譜探究土壤有機元素組成的變化。

2.根據權利要求1所述的一種測定外生菌根真菌影響土壤膠體表面特征與組成的方法，其特征是：真菌菌液的制備方法，首先在固體MMN培養基上培養真菌，反復繼代，直至無雜菌產生為止，然后用液體MMN培養基（去掉瓊脂）培養15～20d，再用4層紗布將培養液過濾掉，用超純水反復沖洗菌絲體，最后將沖洗干凈的菌絲體移至研缽中，充分進行研磨，然后移至離心管內，12000rpm離心10min（4℃），提取的上層懸浮液即為真菌菌液。

3.根據權利要求1所述的一種測定外生菌根真菌影響土壤膠體表面特征與組成的方法，其特征是：將野外采集的土壤去除植物根系、磚頭石塊等雜質，混合均勻、磨碎，0.25mm過篩，稱取一定量的土壤，使土壤：超純水的比例為1：100，充分混勻后，自然沉降24h，將上層懸浮液取出，12000rpm離心10min（25℃），棄去上清液，底層即為土壤膠體原液，最后將土壤膠體原液進行稀釋，得實驗所用的土壤膠體溶液。

4.根據權利要求1所述的一種測定外生菌根真菌影響土壤膠體表面特征與組成的方法，其特征是：激光粒度儀主要觀察土壤膠體顆粒粒徑大小的變化，首先取4ml土壤膠體溶液加入10μl真菌菌液，對照組用10μl超純水代替真菌菌液，然后將二者混合后的溶液12000rpm離心10min（4℃），棄去上清液，加4ml超純水將底層土壤膠體溶解，再進行激光粒度儀的觀察，通過與對照組進行比較，觀察經真菌菌液處理后土壤膠體的顆粒大小和分布情況。

5.根據權利要求1所述的一種測定外生菌根真菌影響土壤膠體表面特征與組成的方法，其特征是：原子力電子顯微鏡主要觀察土壤膠體表面特征的變化，首先取4ml土壤膠體溶液加入10μl真菌菌液，對照組用10μl超純水代替真菌菌液，然后將二者混合后的溶液12000rpm離心10min（4℃），棄去上清液，加4ml超純水將底層土壤膠體溶解，再用膠頭滴管將土壤膠體溶液滴在云母片上，真空干燥24h后，進行原子力電子顯微鏡觀察，通過與對照組進行比較，觀察土壤膠體表面經真菌菌液處理后的變化。

6.根據權利要求1所述的一種測定外生菌根真菌影響土壤膠體表面特征與組成的方法，其特征是：掃描電鏡主要觀察土壤膠體表面特征的變化，首先取4ml土壤膠體溶液加入10μl真菌菌液，對照組用10μl超純水代替真菌菌液，將二者混合后的溶液12000rpm離心10min（4℃），棄去上清液，加4ml超純水將底層土壤膠體溶解，用膠頭滴管將土壤膠體溶液滴在樣品臺上，真空干燥24h后，對樣品進行噴金處理(5-10nm，25mA，3min)，然后進行掃描電鏡的觀察，通過與對照組進行比較，觀察土壤膠體表面經真菌菌液處理后的變化。

7.根據權利要求1所述的一種測定外生菌根真菌影響土壤膠體表面特征與組成的方法，其特征是：X射線衍射主要辨認土壤的礦物組成，并分析各礦物質晶粒尺寸和相對結晶度的變化，首先取4ml土壤膠體溶液加入10μl真菌菌液，對照組用10μl超純水代替真菌菌液，然后將二者混合后的溶液12000rpm離心10min（4℃），棄去上清液，加4ml超純水將底層土壤膠體溶解，再用膠頭滴管將土壤膠體溶液滴在載物片上，真空干燥24h后，進行X射線衍射的觀測，根據X射線衍射圖譜的峰位推斷土壤包含的主要礦物質，利用Jade5軟件對圖譜曲線進行平滑，求各峰的晶粒尺寸大小和相對結晶度（相對結晶度=結晶峰面積/(無定形峰面積+結晶峰面積)*100），最后與對照組進行比較，計算經真菌菌液處理后晶粒尺寸及相對結晶度的變化量。