[發(fā)明專利]一種豬瘟活疫苗效力檢驗方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310239545.3 | 申請日： | 2010-06-22 |
| 公開（公告）號： | CN103336116A | 公開（公告）日： | 2013-10-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張許科;孫進忠;喬榮岑 | 申請（專利權(quán)）人： | 普萊柯生物工程股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京華夏正合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11017 | 代理人： | 韓登營 |
| 地址： | 471000 *** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 豬瘟 疫苗 效力 檢驗 方法 | ||
1.一種豬瘟活疫苗效力檢驗方法，其特征在于：包括如下步驟：
(1)準(zhǔn)備傳代細胞
將長滿單層的細胞，用EDTA-胰酶消化分散，得到傳代細胞懸液；
(2)豬瘟活疫苗在傳代細胞中的病毒含量測定
用細胞維持液將凍干豬瘟活疫苗回溶并稀釋，將活疫苗稀釋液與步驟（1）中細胞懸液加入細胞培養(yǎng)板中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時設(shè)立不接毒正常細胞對照；
(3)間接免疫熒光(IFA)方法檢測步驟（2）所得細胞中病毒含量
①將細胞培養(yǎng)板從培養(yǎng)箱中取出，棄去培養(yǎng)板孔內(nèi)液體，用PBS洗滌；
②加入丙酮水溶液固定；
③棄去丙酮水溶液，用PBS洗滌；
④加入PBS稀釋的豬瘟陽性血清(一抗)；
⑤棄去一抗，PBS洗滌；
⑥加入PBS稀釋的FITC標(biāo)記兔抗豬IgG(二抗)；
⑦棄去二抗，用PBS洗滌，最后加入PBS保存；
⑧置于熒光顯微鏡下觀察熒光情況，判定豬瘟活疫苗效力。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟活疫苗效力檢驗方法，其特征在于：步驟(1)中在細胞板中加入細胞懸液的同時，加入步驟(2)中經(jīng)稀釋的豬瘟疫苗液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟活疫苗效力檢驗方法，其特征在于：步驟(2)中所述豬瘟活疫苗稀釋是在0-8℃低溫環(huán)境下進行的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟活疫苗效力檢驗方法，其特征在于：步驟(2)中培養(yǎng)箱是CO2培養(yǎng)箱，溫度為36-37℃，CO2含量為2.5%-5%，培養(yǎng)時間為2-5天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟活疫苗效力檢驗方法，其特征在于：步驟(3)中PBS洗滌的次數(shù)為2-7次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟活疫苗效力檢驗方法，其特征在于：步驟(3)中丙酮水溶液溫度為0-8℃，濃度為30%-90%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬瘟活疫苗效力檢驗方法，其特征在于：步驟(3)中一抗的稀釋倍數(shù)選擇范圍為50-1000倍，二抗的稀釋倍數(shù)選擇范圍為50-10000倍。
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