[發明專利]一種表面光滑的葡聚糖凝膠微球的制備方法

有效

• 申請號: 201310239448.4
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN103301469A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 張天柱;朱長皓;顧寧
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: A61K47/36
• 分類號: A61K47/36;A61K9/16;C12N5/00
• 代理公司: 江蘇永衡昭輝律師事務所 32250
• 代理人: 齊旺

技術領域

本發明涉及聚合物微球的制備技術，特別涉及一種用反向懸浮聚合發法制備表面光滑葡聚糖凝膠微球的方法，所得微球可以用作細胞培養微載體及藥物載體。

背景技術

葡聚糖是以葡萄糖為單糖的天然非動物源低聚糖，來源廣泛，價格便宜，可以通過酶來降解，可以用作細胞培養的材料。按照其單糖的數目，可分為葡聚糖100K，葡聚糖40K，葡聚糖20K等。其難溶于水，不溶于乙醇、乙醚等有機溶劑，本身雖然抗蛋白質吸附和細胞黏附，但結構中含有豐富的羥基官能團，因此易于化學修飾，現在已經廣泛應用于二維或者多孔軟組織支架、藥物釋放等領域。

制備微球的化學方法主要有：分散聚合法、種子聚合法、懸浮聚合法和乳液聚合法。分散聚合法錨定于粒子表面使聚合物穩定地分散在介質中，形成分散體系，微球粒徑一般在0.5~20μm；種子聚合法是利用低皂或無皂乳液聚合或分散聚合等方法制成小粒徑單分散的高聚物粒子，接著將這些小粒子作為種子，用單體、交聯劑及惰性分子進行溶脹，使顆粒變大，然后再進行聚合；本發明采用反向懸浮聚合法，反相懸浮聚合工藝是現在普遍采用的制備凝膠微球的簡易方法，是以水相為分散相，油相為連續相，制成油包水型(w／o型)的懸浮液，采用水溶性交聯劑進行反應的方法。可以將微球的粒徑控制在微納米尺度范圍內，既不需要高溫，引入高壓裝置，也不需要引起相分離的凝聚劑。

發明內容

本發明的目的在于為了提供一種表面光滑的葡聚糖凝膠微球的制備方法，工藝簡單，周期短，沒有任何環境污染，適用于大規模生產。

本發明的另一個目的在于提供一種表面光滑的葡聚糖凝膠微球，粒徑均一，表面光滑，形貌結構統一。

本發明提供的技術方案如下：

一種表面光滑的葡聚糖凝膠微球的制備方法，包括以下步驟：?

（1）改性葡聚糖的制備(參考文獻：吳紅,張鎮西.PH敏感的GMA修飾葡聚糖水凝膠的制備與體外釋藥研究[j].第四軍醫大學學報,2005;26(21):1954-1956)：N₂氛圍下，葡聚糖和丁二酸酐溶于二甲亞砜（DMSO）中，在催化劑4-二甲氨基吡啶（DMAP）的催化作用下，室溫反應48h，得到澄清液體，無水乙醇反復洗滌去除溶劑后，室溫真空干燥，得到改性葡聚糖；?葡聚糖中吡喃型葡萄糖殘基：酸酐=8:1（摩爾比）；?采用的溶劑是二甲亞砜（DMSO）；葡聚糖分子量為40K。

????（2）水相溶液的制備：步驟（1）得到的改性的葡聚糖和交聯劑按-OH：-COOH=1:1~20:1（摩爾比）混合均勻溶于水中，得到濃度為0.02g/ml-0.10g/ml水相溶液；該濃度是改性的葡聚糖和交聯劑混合物在水溶液的濃度；

所用的交聯劑為聚甲基乙烯基醚共聚馬來酸（PVME-co-MA）、聚-異丙基丙烯酰胺丙烯酸（PNIPAM-co-AAC）、聚丙烯酸(PAA)之任一種有機酸；

（3）微球的形成：在加熱、攪拌條件下，將步驟（2）得到的水相溶液逐滴滴入到油相中，反應12h～72h后，靜置，形成的微球沉淀到反應容器的底部，棄去上清液后，用正己烷清洗微球表面的二甲基硅油，將去除剩余油相的微球真空干燥，除掉表面的正己烷，得到表面光滑的葡聚糖凝膠微球；

???水相與油相的體積比為1:2-1:10；攪拌速率為600rpm-2000rpm；

?油相采用二甲基硅油；油相溫度控制在60℃-250℃，這是由于葡聚糖和酸進行酯化反應需要一定的溫度；

由于在兩相溶液中，水相的小液滴內發生酯化反應，而機械攪拌促使他們懸浮于油相中，隨著水相的揮發，形成O/W相，逐步形成酸和葡聚糖酯化反應后的微球。

附圖說明

圖1是實施例1獲得的葡聚糖凝膠微球的掃描電鏡圖；所得葡聚糖凝膠微球尺寸均一，表面光滑且形貌結構統一;

圖2是實施例2獲得的葡聚糖凝膠微球的掃描電鏡圖；

圖3是本發明實施例4獲得的葡聚糖凝膠微球的掃描電鏡圖：

圖4是實施例6獲得的葡聚糖凝膠微球溶脹后的光學顯微鏡圖；

圖5是實施例7獲得的葡聚糖凝膠微球溶脹后的光學顯微鏡圖；

圖6是實施例8獲得的葡聚糖凝膠微球溶脹后的光學顯微鏡圖；

由以上圖可見，本發明制備得到葡聚糖凝膠微球尺寸不隨水相溶液濃度的影響，粒徑均一，表面光滑形貌結構統一。

具體實施方式