[發(fā)明專利]一種雞源性抗雞新城疫病毒P蛋白的單鏈抗體、其制備方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310236963.7
• 申請日: 2013-06-14
• 公開（公告）號: CN103304663A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱建國;張艷玲;李本強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/42;A61P31/14;C12R1/19
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 張澤純

1.一種雞源性抗雞新城疫病毒P蛋白的單鏈抗體，是與原核表達(dá)的新城疫病毒P蛋白結(jié)合的單鏈抗體，其至少具有如SEQ?ID?No.1所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)、如SEQ?ID?No.2所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和位于輕鏈可變區(qū)與重鏈可變區(qū)之間的中間連接肽。

2.如權(quán)利要求1所述的單鏈抗體，其特征在于其具有如SEQ?ID?No.3所示的氨基酸序列。

3.一種編碼如權(quán)利要求1所述的基因，其特征在于其具有SEQ?ID?No.4所示的核苷酸序列。

4.如權(quán)利要求3所述的基因，其特征在于所述核苷酸序列中進(jìn)一步包含內(nèi)切酶位點(diǎn)NotI、NcoI，其中NcoI為CCATGG，NotI為GCGGCCGC。

5.含有權(quán)利要求3-4任一項所述的基因的表達(dá)載體。

6.如權(quán)利要求5所述的表達(dá)載體，其特征在于所述載體為原核表達(dá)載體。

7.如權(quán)利要求6所述的表達(dá)載體，其特征在于所述載體為pOPE101-XP載體。

8.一種制備如權(quán)利要求1所述的雞源性抗雞新城疫病毒P蛋白的單鏈抗體的方法，包括以下步驟：

（1）采用RT-PCR直接從ND?GA/VA疫苗免疫的雞脾臟RNA中擴(kuò)增出抗體編碼基因的重鏈可變區(qū)基因和輕鏈可變區(qū)基因；

（2）利用SOE-PCR法將linker與VH基因和VL基因相連構(gòu)建雞源性單鏈抗體編碼基因；

（3）將步驟（2）的雞源性單鏈抗體基因克隆到原核表達(dá)載體pOPE101-XP中，構(gòu)建重組質(zhì)粒；

（4）將步驟（3）的原核表達(dá)載體pOPE101-XP轉(zhuǎn)化入E.coli?JM109感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)、表達(dá)單鏈抗體；

（5）將步驟（4）表達(dá)的單鏈抗體用以原核表達(dá)的新城疫病毒P蛋白作為包被抗原建立的間接ELISA進(jìn)行篩選，陽性克隆即為抗新城疫病毒P蛋白的單鏈抗體；

（6）分離純化步驟（5）所得陽性克隆培養(yǎng)產(chǎn)物即獲得所述雞源性抗雞新城疫病毒P蛋白的單鏈抗體。

9.如權(quán)利要求1或2所述的雞源性抗雞新城疫病毒P蛋白的單鏈抗體在用于制備雞新城疫的預(yù)防和/或治療藥物中的應(yīng)用。